[发明专利]检测分枝杆菌感染的试剂、方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物医学检验领域，涉及一种微生物分子生物学检测方法，尤其涉及检测结核感染的试剂、方法和试剂盒。

背景技术

结核病是当今一个主要的公共健康问题，它的病原体是结核杆菌，属于分枝杆菌属。全世界每年大约有800-1000万新发结核病例，每年有200-300万人因此而失去生命，结核病是引起成年人死亡的头号传染病。据WHO报道，全球三分之一的人口（约20亿）已感染了结核杆菌，如不采取措施，近10年内还将有约3亿人受结核杆菌感染。据第四次全国流行病学调查显示，我国受结核杆菌感染人数超过4亿，每年有13万人死于结核病，是全球22个结核病高负担国家之一，结核病人数位居世界第二。

在全面实施DOTS（直接督导治疗）策略后，中国的结核发病率并没有如预期地出现下降，这与潜在的大量未被诊断的潜伏感染以及痰菌阴性结核病人未被及时诊断有关，这些感染者是一个巨大的结核病源库，DOTS计划只能针对发病的肺结核患者，而对于消灭潜伏感染的病人或者痰菌阴性的症状不典型的患者没有贡献。现在，发达国家已经充分注意到这一现象，在7年前甚至更早已经启动对潜伏感染患者的干预。全球结核控制的一项策略是在高危人群中实施有效的筛查计划，这样可以鉴别出那些有潜伏感染的病人，通过治疗他们来预防结核。而其中最突出的问题是如何准确迅速地发现潜伏感染者和高危人群并加以控制。

目前诊断结核患者中主要采用的方法有：胸部X光片、涂片镜检、培养法、TST皮试等。其中X光片无法早期及时发现；涂片法敏感性特异性差；培养法耗时长，需要4-8周时间；TST皮试实验则特异性差，无法准确区分BCG(卡介苗)接种者和结核病患者。

特异性抗原诊断一直是确认和评估病原体感染及感染状况较为可靠的方法，且有早期诊断价值，已经在HBV、HCV、HIV等疾病的诊断方面获得了广泛的应用。由于人体在对抗结核杆菌的感染中，细胞免疫起到了关键性的作用，所以寻找结核杆菌特异性的T细胞抗原和检测T细胞免疫反应已经成为今年来研究的热点。国际上已有报道的T-SPOT试剂正是使用结核杆菌的特异性抗原ESAT-6和CFP-10，以Elispot方法诊断结核早期感染(中国专利公开号：1350546)。

但是ESAT-6、Cfp-10这两个抗原属于结核杆菌早期分泌蛋白，在结核持续感染中分泌量减少，导致检测的敏感性不足，局限了该试剂的推广。另一方面有研究显示T-SPOT试剂在发展中国家的效果并不理想，推测可能与发展中国家非结核分枝杆菌感染率高有关。另外T-SPOT试剂价格昂贵，每一人份约合80美金，在发展中国家很难推广。

发明内容

为了解决上述现有技术中的问题，本发明的目的是提供了特异性高、能够检测应用范围广且成本低廉的检测结核感染的试剂、方法和试剂盒。

本发明的目的之一是提供检测分枝杆菌感染的试剂，所述试剂中包含SEQ ID NO 1-5所代表的蛋白、多肽或类似物中的任何一种或多种。

SEQ ID 1: vnsplvvgflacftliaaig

SEQ ID 2: atpvrlaevlvtcaaftfl

SEQ ID 3: wfatlgfgagrlrglftnpg

SEQ ID 4: lrglftnpgswrildgliav

SEQ ID 5: vnsplvvgflacftliaaigaqnafvlrqgiqrehvlpvvalctvsdivliaagiagfgaligahpralnvvkfggaafligygllaarrawrpvalipsgatpvrlaevlvtcaaftflnphvyldtvvllgalanehsdqrwlfglgavtasavwfatlgfgagrlrglftnpgswrildgliavmmvalgisltvt

在本发明的较佳实施例中，所述类似物包括类似肽或通过生物素/抗生物素蛋白链菌素系统将多个类似肽的MHC II分子聚合在一起的聚合分子，所述类似肽与SEQ ID NO 1-5所代表的氨基酸序列同源。

本发明的另一目的是提供一种应用上述试剂检测分枝杆菌的方法，包括以下步骤：

步骤1，使权利要求1所述的试剂与宿主T细胞相接触，所述试剂中包含SEQ ID NO 1-5所代表的蛋白、多肽或其类似物中的任何一种或多种；

步骤2，通过测定T细胞与蛋白、多肽或类似物接触后状态是否发生变化，从而确定T细胞是否识别所述蛋白、多肽或类似物：

能够识别所述蛋白、多肽或类似物的，则判定为阳性、感染分支杆菌；