[发明专利]一种有效抑制小鼠mCD14基因表达的小干扰核糖核酸分子

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术中的基因表达、核糖核酸干扰和检测技术领域，具 体涉及一种有效抑制小鼠mCD14基因表达的小干扰核糖核酸分子；本发明 还涉及该种有效抑制小鼠mCD14基因表达的小干扰核糖核酸分子的生物学 筛选方法。

背景技术

白细胞分化抗原14(cluster of differentiation antigen，CD14)是一种存在 于单核细胞、巨噬细胞等细胞表面的分化抗原，为体内介导脂多糖 (lipopolysaccharide，LPS)生物效应的重要受体之一。白细胞分化抗原14 (CD14)包括膜结合型白细胞分化抗原14(membrane bound CD14，mCD14)和 可溶性白细胞分化抗原14(soluble CD14，sCD14)两种形式：膜结合型白细胞 分化抗原14(mCD14)是分子量为55千道尔顿(KD)的糖蛋白，其C-末端借助 糖基磷酯酰肌醇(glucose phosphatidylinositol，GPI)结构锚附于细胞膜表面； 可溶性白细胞分化抗原14(sCD14)分子有49KD和55KD两种形式，缺乏糖 基磷酯酰肌醇(GPI)锚。膜结合型白细胞分化抗原14(mCD14)是由含有白细 胞分化抗原14(CD14)基因的单核细胞、巨噬细胞，自行转录、翻译蛋白质 多肽链，在高尔基复合体内糖化后，其羧基端再与磷酯酰肌醇 (phosphatidylinositol，PI)结合，并由磷酯酰肌醇的磷脂部分与细胞膜连接。 生理条件下，膜结合型白细胞分化抗原14(mCD14)主要表达于成熟的单核巨 噬细胞，微弱表达于中性粒细胞、肾小球膜细胞、乳房细胞和B细胞，介 导脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)对这些细胞的激活作用。

内毒素是革兰氏阴性菌细胞外膜的组成部分，其主要成分为脂多糖 (LPS)，脂多糖一旦进入体内，将诱导机体产生多种炎症介质的反应，导致 机体的严重损伤。在革兰氏阴性细菌引起的炎症反应过程中，脂多糖受体起 着关键作用，是脂多糖作用的重要门户。白细胞分化抗原14(CD14)被认为 是脂多糖信号转导中最重要的脂多糖受体，白细胞分化抗原14(CD14)在介 导脂多糖激活靶细胞及炎症反应中起关键作用；研究表明，通过抑制白细胞 分化抗原14(CD14)破坏脂多糖所激活的靶细胞炎症反应是一个可行的治疗 方法。

核糖核酸干扰(RNA interference，RNAi)是指由特定双链核糖核酸(double  stranded RNA，dsRNA)引发同源信使核糖核酸(messenger RNA，mRNA)降解 的转录后基因静默机制，这类特定双链核糖核酸被裂解成小干扰核糖核酸分 子(siRNAs)，并能导致同源信使核糖核酸(mRNA)在核糖核酸诱导的静默复 合体(RNA-induced silencing complex，RISC)作用下降解。核糖核酸干扰 (RNAi，Ribonucleic acid interference)RNA是目前简单而高效地阻断哺乳动 物细胞内特异基因表达的最有效方法之一，可达到基因敲除效果，且安全性 好。但对于核糖核酸干扰(RNAi)来说，并不是所有针对靶基因信使核糖核酸 (mRNA)序列随机合成的小干扰核糖核酸分子(siRNAs)都能引起有效的基因 沉默，干扰靶序列的选择对干扰效率的影响是至关重要的。因此，对能有效 抑制特异基因表达的小干扰核糖核酸分子(siRNAs)的筛选是应用核糖核酸 干扰(RNAi)技术进行基因功能、基因治疗等相关研究的重要基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种有效抑制小鼠mCD14基因表达的小干扰核糖 核酸分子，能够有效、特异性的抑制小鼠mCD14基因表达，解决了现有靶 基因mRNA序列随机合成的siRNA并不都能引起有效基因沉默的问题。

本发明的另一目的是提供一种有效抑制小鼠mCD14基因表达的小干扰 核糖核酸分子的生物学筛选方法。

本发明所采用的技术方案是，一种能有效抑制小鼠mCD14基因表达的 小干扰核糖核酸分子，其基因序列是：

正义，gggcaguucacugauauuatt(5’-3’)，

反义，uaauaucagugaacugccctt(5’-3’)。

本发明所采用的另一技术方案是，一种能有效抑制小鼠mCD14基因表 达的小干扰核糖核酸分子的生物学筛选方法，该筛选方法按照以下步骤实 施：