[发明专利]一种检测玉米赤霉醇的无标记型电化学免疫传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种检测玉米赤霉醇的无标记型电化学免疫传感器及其制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)石墨烯的制备：将氧化石墨烯还原成石墨烯；

(2)硫堇-石墨烯混合溶液的制备：将硫堇溶液和石墨烯溶液混合之后超声，得到硫堇-石墨烯混合溶液；

(3)建立无标记型电化学免疫传感器，测定玉米赤霉醇，绘制工作曲线。

2.根据权利要求1所述的一种检测玉米赤霉醇的无标记型电化学免疫传感器及其制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的石墨烯的制备具体如下：首先，将氧化石墨烯放入石英管并通入氩气10～20min，然后迅速加热至1000℃，并持续1min，即得石墨烯。

3.根据权利要求1所述的一种检测玉米赤霉醇的无标记型电化学免疫传感器及其制备方法，其特征在于：所述的硫堇-石墨烯混合溶液的制备，具体如下：利用步骤(1)合成的石墨烯配制浓度为1.0mg·mL^-1的石墨烯溶液，另外配制浓度为1.0mg·mL^-1的硫堇溶液，并将得到的石墨烯溶液和硫堇溶液按照体积比0.6～1.3∶1混合15～20h，之后超声5～30min，即制得硫堇-石墨烯混合溶液。

4.根据权利要求1所述的一种检测玉米赤霉醇的无标记型电化学免疫传感器及其制备方法，其特征在于：步骤(3)所述的建立无标记型电化学免疫传感器，具体如下：

(1)将直径为3mm的玻碳电极依次用粒径为1.0、0.3和0.05μm的三氧化二铝抛光粉抛光处理，再用二次水清洗干净，吹干，最后将电极置于0.05mol·L^-1铁氰化钾溶液中，在-0.6～0.6V范围内扫描，使峰电流差达到60～90mA；

(2)将2～8μL步骤(2)配制的硫堇-石墨烯混合溶液滴涂到玻碳电极表面，晾干；

(3)用0.1mol·L^-1pH＝7.0的磷酸盐缓冲溶液清洗电极表面，去除未结合颗粒；

(4)滴涂3～10μL体积分数为2.0％的戊二醛溶液至电极表面，保持湿润放置1h，二次水清洗，晾干成膜；

(5)采用0.1mol·L^-1pH＝7.0的磷酸盐缓冲溶液配制玉米赤霉醇抗体溶液，滴涂3～10μL10μg·mL^-1的玉米赤霉醇抗体溶液至电极表面，置于4℃冰箱内保持湿润1h，之后二次水清洗，晾干；

(6)滴涂3～10μL质量分数为1.5％的牛血清白蛋白溶液至电极表面，置于4℃冰箱内1h，晾干，待用。

5.根据权利要求1所述的一种检测玉米赤霉醇的无标记型电化学免疫传感器及其制备方法，其特征在于：步骤(3)所述的测定玉米赤霉醇，绘制工作曲线，具体如下：

(1)采用0.1mol·L^-1pH＝7.0的磷酸盐缓冲溶液配制不同浓度的玉米赤霉醇溶液，将3～10μL不同浓度的玉米赤霉醇溶液分别滴涂至所得的不同电极表面，反应0.5～2h，晾干后连接至电化学工作站中，分别将电极浸于pH＝7.0的磷酸盐缓冲溶液中测定其氧化还原电流变化；

(2)根据所得电流差值与玉米赤霉醇浓度呈线性关系，绘制工作曲线。