[发明专利]一种提高人工湿地脱氮效率的固定化细菌制备方法及应用

权利要求书

1.一种提高人工湿地脱氮效率的固定化细菌制备方法：其步骤是：

1）从增氧型复合垂直流人工湿地中筛选出好氧反硝化菌株，在恒温28℃的培养箱中进行菌株的筛选培养；

      所述培养基组成是：琼脂 20g， 硝酸钾1g， 磷酸二氢钾 1g， 六水氯化亚铁 0.5g，七水氯化钙 0.2g，七水硫酸镁 1g，琥珀酸钠 8.5g，溴瑞香草酚兰试剂1mL；蒸馏水 1000mL，用1mol?L^-1 氢氧化钠调节pH至7.0-7.3；

2）好氧反硝化细菌的菌悬液的制备：

挑选1-2环斜面保存的好氧反硝化细菌，加入到经过高温高压：121℃，105-110kPa灭菌的富集培养基中，在30℃下曝气培养5天，得到菌液，将得到的菌液离心，弃去上清液，用0.9%w/v生理盐水离心洗涤2-3次，再用0.9%w/v生理盐水稀释到500ml左右（菌体：生理盐水=20：250v/v），混合均匀，4℃贮藏备用；

所述培养基组成是：双蒸水750mL，硝酸钾 2 g，磷酸二氢钾1 g，磷酸氢二钾 1 g，硫酸镁0.2 g，柠檬酸钠 5 g，微量盐溶液 2mL；

3）用海藻酸钠-聚乙烯醇包埋获得的固定化好氧反硝化菌：

5%w/v聚乙烯醇和5%w/v海藻酸钠的混合溶液60mL，微波加热，使其完全混合，高温高压灭菌：121℃，105-110kPa，冷却至室温，与80mL好氧反硝化菌悬液充分混合；将此混合液用注射器挤入到4%w/v氯化钙溶液中，冰浴，边滴边搅拌，使其形成直径为2mm的小球；将形成的小球放置于4℃冰箱中交联固化11-13h，用无菌水清洗小球，再放入饱和硼酸溶液中，于4℃冰箱中交联固化11-13h，用生理盐水洗涤2-3次备用。

2.权利要求1所述的一种提高人工湿地脱氮效率的固定化细菌在人工湿地中的应用。