[发明专利]日本血吸虫重要抗原的高通量筛选及其在血吸虫病诊断中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域；更具体地，本发明公开了日本血吸虫重要抗原的高通量筛选及其在血吸虫病诊断中的应用，本发明还涉及一类血吸虫阳性抗原，并提供这些抗原在血吸虫病诊断和疫苗制备中的应用。

背景技术

血吸虫病是一种严重威胁人类健康的人畜共患病，全球每年因血吸虫病死亡人数约28万。经过几十年的努力，我国血吸虫病防治工作取得了举世瞩目的成就，然而目前我国仍有现症感染人群约50万，尤其是目前大量人口流动，加之人们对血吸虫病防范意识松懈，导致我国血吸虫病防治形势不容乐观，防治任务依然艰巨。

血吸虫的诊断是防治血吸虫的重要前提和手段之一。精确的诊断技术不仅可以用于患者确诊，还可用于划分流行区等级、评估流行态势和考核防控效果等。

目前血吸虫病诊断方法主要有三种，一是病原学检测方法，二是免疫学检测方法，三是分子生物学检测方法。病原学检测方法主要包括虫卵检测法(Kato-Katz Technique)和毛蚴孵化法(Hatching Test)。免疫学检测方法主要有间接红血球凝集试验(Indirect Hemagglutination Assay，IHA)、酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)、环卵沉淀试验(Circum Oval Precipitating Test，COPT)以及斑点免疫金渗滤试验(Dotimmunogoldfiltration Assay，DIGFA)。分子生物学方法是通过血吸虫特异的核酸扩增技术来进行诊断。

以上三种方法各有优缺点：病原学检测结果虽然目前仍然是血吸虫病确诊的金标准，但是病原学检测敏感度低，费时费力，同时还有污染环境的危险。免疫学方法中的环卵沉淀试验(COPT)和间接红血球凝集试验(IHA)特异性高，但敏感性低，不能广泛使用。分子生物学的检测方法敏感性高，但易出现假阳性，同时该方法对实验条件要求较高，目前仅停留在实验室研究阶段，无法广泛应用。

相比而言，ELISA技术具有操作简单、敏感度高、易标准化等优点，并且广泛应用在多种疾病诊断中，因此是血吸虫病诊断优先发展的方向。ELISA技术的关键是抗原的选择。目前市场上血吸虫抗体诊断ELISA使用的抗原是虫卵可溶性抗原(SEA)，但SEA是粗抗原，成分比较复杂，受个体生理和环境情况影响很大，使得SEA-ELISA的特异性较差，容易出现交叉反应，无法区分现症感染和既往感染。此外，虫卵可溶性抗原SEA通常要从动物肝脏中的虫卵提取，检测条件难以精确控制，且SEA-ELISA的方法成本较高，因此导致批次间的结果不稳定，无法产业应用。

利用基因工程技术生产重组蛋白是替代SEA的潜在新型抗原。重组抗原具有产量高、价格低、交叉反应少等优点，但抗原的选择依然是制约产业应用的瓶颈。关键目前本领域内还没有有效的、高敏感性、高特异性的抗原分子用作ELISA反应检测血吸虫。因此本领域迫切需要开发用于血吸虫病诊断和防治的新靶标抗原分子。

发明内容

本发明的目的在于提供一类用于日本血吸虫的阳性抗原及其用途。

本发明的另一目的在于提供一种高通量血吸虫抗原的筛选方法。

本发明的另一目的在于提供一种血吸虫病诊断试剂和试剂盒。

在本发明的第一方面，提供了一种血吸虫阳性抗原，所述抗原选自：

(a)氨基酸序列如SEQ ID NO：1-24所示的多肽：

(b)将SEQ ID NO：1-24氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基取代、缺失或添加而形成的具有免疫原性的衍生多肽；

(c)与SEQ ID NO：1-24所示氨基酸序列的同源性≥90％的、具有免疫原性的多肽；或

(d)具有免疫原性的多肽(a)-(c)的片段。

在另一优选例中，所述抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO：1-8所示。

在另一优选例中，所述抗原用于制备检测血吸虫的试剂或试剂盒。

在本发明的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，包括一核苷酸序列，所述核苷酸序列选自下组：

(a)编码如本发明第一方面所述阳性抗原的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。

在另一优选例中，所述多核苷酸编码具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的抗原。

在本发明的第三方面，提供了一种载体，所述载体含有本发明的第二方面所述的多核苷酸。