[发明专利]以固体发酵生产枯草芽孢杆菌活菌的方法

权利要求书

1.一种以固体发酵生产枯草芽孢杆菌活菌的方法，步骤是：

(1)菌种选择：选用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ACCC03120菌株；

(2)种子培养：将步骤(1)所述菌株，在无菌条件下用接种环接1～2环于90～100mL液体种子培养基中，以150～180转/分钟的转速、35～40℃震荡培养24～36小时，得一级种子液；以体积比1～3％的接种量，将一级种子液再次接种于同样配方的液体种子培养基中，以150～180转/分钟的转速、35～40℃震荡培养18～36小时，得二级种子液；

(3)固体发酵培养：以5～10％质量比的接种量，将二级种子液接种于经121℃、30分钟灭菌的固体培养基中，随后将接种的固体培养基以4～7厘米的厚度平摊于底部带空隙的料筐中，再将料筐置于灭菌的固体发酵房内的搁架上发酵，控制环境温度在30～35℃，并时常翻料使料筐中层料温不高于47℃，同时利用空压机往固体发酵房中通无菌风，发酵48～72小时，发酵结束；

(4)发酵产物晾干：将步骤(3)发酵产物平摊于干净的水泥地面上自然风干35～45小时，其间取样镜检和测定水分，当芽孢率超过70％，含水率低于10％时，风干过程结束，收集产物并粉碎，过80目筛，所得粉末即为含枯草芽孢杆菌活菌的固体发酵成品；

上述液体种子培养基配方及制备方法为：以重量份计，将玉米粉0.5-2份、豆浆1-4份、葡萄糖0.1-1份、硫酸铵0.1-1份、硫酸锰0.005-0.02份、硫酸镁0.001-0.03份、磷酸氢二钾0.001-0.03份混合，加纯净水1-91份溶解，调节pH值至6-8，蒸汽灭菌后备用；

上述固体发酵培养基配方及制备方法为：以重量份计，将麸皮20-40份、玉米粉2-8份、豆粕2-8份、红糖0.1-5份、糖蜜0.1-5份、稻壳1-10份、硫酸铵0.1-1份、硫酸镁0.01-1份、硫酸锰0.01-1份、酵母粉0.001-0.1份、自来水20-75份均匀混合，然后蒸汽灭菌备用，自然pH，不需额外调节。

2.如权利要求1所述以固体发酵生产枯草芽孢杆菌活菌的方法，其特征在于，步骤(2)所述培养温度为37℃。

3.如权利要求1所述以固体发酵生产枯草芽孢杆菌活菌的方法，其特征在于，步骤(2)所述培养时间为28小时。

4.如权利要求1所述以固体发酵生产枯草芽孢杆菌活菌的方法，其特征在于，步骤(3)所述环境温度为30℃。

5.如权利要求1所述以固体发酵生产枯草芽孢杆菌活菌的方法，其特征在于，步骤(3)所述培养时间为56小时。

6.如权利要求1所述以固体发酵生产枯草芽孢杆菌活菌的方法，其特征在于，步骤(3)所述无菌风的气流速度为2-6米/秒。

7.如权利要求1所述以固体发酵生产枯草芽孢杆菌活菌的方法，其特征在于，步骤(4)所述风干时间为40小时。