[发明专利]一种β-伴大豆球蛋白单克隆抗体制备方法

权利要求书

1.一种β-伴大豆球蛋白单克隆抗体制备方法,其特征在于该方法具体步骤是：

步骤(1).制备抗原：采用化学法或基因工程技术制备含β-伴大豆球蛋白α亚基IgE抗原表位的表位小肽，然后将此表位小肽耦联到载体蛋白或载体多肽上，制备免疫用抗原；

步骤(2).免疫动物：将耦联载体的表位小肽与弗氏佐剂混合免疫动物，第一次用完全弗氏佐剂，以后用不完全弗氏佐剂，每两周免疫一次，并于融合前2～4天等量抗原加强免疫；

步骤(3).细胞融合、筛选及克隆化：选取抗血清效价最高的动物取脾细胞与骨髓瘤细胞体外融合，经三次亚克隆获得稳定分泌抗β-伴大豆球蛋白单克隆抗体的细胞株；

步骤(4).细胞培养：将上述细胞株体外扩大培养后，收集上清液；

步骤(5).腹水制备：将扩大培养后的杂交瘤细胞株注入动物腹腔，以大量生产腹水，提取、纯化后即可得到β-伴大豆球蛋白单克隆抗体。

2.如权利要求1所述的一种β-伴大豆球蛋白单克隆抗体制备方法,其特征在于步骤(1)所述的表位小肽中氨基酸序列如下述7条的任意1条：

①NH₂-repqqpgekeededeqprpC-CONH₂；

②NH₂-EWPRKEEKRGEKGC-CONH₂；

③NH₂-khnkclqscnserdsyrn-CONH₂；

④NH₂-IlefnskpnC-CONH₂；

⑤NH₂-LQRFNQRSPQLQNLRC-CONH₂；

⑥NH₂-SELRRHKNKNPFLFGC-CONH₂；

⑦NH₂-KNPFLFGSNRFETLFC-CONH₂。

3.如权利要求1所述的一种β-伴大豆球蛋白单克隆抗体制备方法,其特征在于：步骤(1)中所述的载体蛋白或载体多肽包括但不限于牛血清白蛋白、卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白。

4.如权利要求1所述的一种β-伴大豆球蛋白单克隆抗体制备方法,其特征在于步骤(2)中供免疫动物包括但不限于小鼠、大鼠、兔。

5.如权利要求2所述的一种β-伴大豆球蛋白单克隆抗体制备方法,其特征在于：所述的表位小肽的氨基酸序列，在不改变表位小肽抗原表位结构的前提下，小肽一端或两端增加有氨基酸。