[发明专利]一种检测猪痢疾的PCR试剂盒及引物有效
申请号: | 201110330683.3 | 申请日: | 2011-10-27 |
公开(公告)号: | CN102373277A | 公开(公告)日: | 2012-03-14 |
发明(设计)人: | 张伟;安健;李宁;高志强;张鹤晓;张利峰;汪琳;柏亚铎;谷强;乔彩霞;蒲静;吴丹;凌凤俊;赖平安 | 申请(专利权)人: | 中华人民共和国北京出入境检验检疫局;中国兽医药品监察所;北京农学院 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
代理公司: | 北京正理专利代理有限公司 11257 | 代理人: | 张文祎 |
地址: | 100026*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 痢疾 pcr 试剂盒 引物 | ||
1.一组检测猪痢疾的引物,其特征在于,该引物序列如序列表SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:2所示,其中SEQ ID NO:1为检测猪痢疾的引物I,SEQ ID NO:2为检测猪痢疾的引物II。
2.一种检测猪痢疾的试剂盒,其特征在于,由以下组分组成:
(1)DNA提取液I:其配制方法为PEG 8000 20.74g,加NaCl 17.53 g,用三蒸水定容至100mL;
(2)DNA提取液II:其配制方法为1.0 mol/L Tris-Cl 2.0mL,2.0 mol/L KCl 5.0mL,0.5 mol/L EDTA 0.5mL,NP-40 1.0 mL, 用三蒸水定容至100mL;
(3)PCR反应液,包括:PCR缓冲液、MgCl2、dNTP、引物I、引物II;其中,引物I的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示,引物II的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示;
(4)Taq DNA聚合酶;
(5)无DNA酶的灭菌纯化水;
(6)阴性对照:DEPC水;
(7)阳性对照:为猪痢疾短/密螺旋体tlyA基因片段,所述tlyA基因片段的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:3所示。
3.根据权利要求2所述的检测猪痢疾的试剂盒,其特征在于:所述PCR反应液为1×PCR缓冲液、3.0mM MgCl2、0.2mM dNTP、0.4μM引物I、0.4 μM引物II。
4.一种检测猪痢疾的PCR方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)提取样品DNA;
(2)对提取的样品DNA进行PCR扩增;
(3)反应条件:
第一步 92℃: 3 min, 1个循环;
第二步 92℃: 10 sec, 46℃: 30 sec,72℃: 1min,30个循环;
第三步 72℃: 7min;
第四步 4℃:保存;
(4) 结果描述及判定:
①质控标准:
阳性对照在470bp处有特异性扩增条带;
阴性对照无特异性扩增条带;
②结果判断:
阳性:在470bp处有特异性扩增条带;
阴性:无特异性扩增条带。
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