[发明专利]树突状细胞联合细胞因子诱导杀伤细胞在肺癌治疗中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物制药和免疫学领域；更具体地，本发明涉及树突状细胞联合细胞因子诱导杀伤细胞在肺癌治疗中的应用。 

背景技术

肺癌是一种严重威胁人类健康的疾病，其中，非小细胞肺癌的死亡率占据首位。在诊断时，多数患者已经晚期(IIIB-IV期)，无法进行手术治疗。IIIB-IV期的非小细胞肺癌患者只能接受化疗为主的治疗方式。化疗的毒副反应包括：骨髓抑制，胃肠道反应和感染性疾病。鉴于化疗的局限性，需要发展一种新颖的治疗模式。 

在不同的治疗模式中，免疫治疗因为其针对性地杀伤肿瘤细胞，具有高效和低毒的作用，而日益受到广泛关注。临床前期研究提示，免疫治疗联合化疗能提供明显的益处。 

然而，至今没有数据显示化疗联合免疫治疗在晚期非细胞肺癌患者中的作用。因此，本领域非常有必要进一步研究DC联合CIK的免疫治疗联合化疗在晚期肺癌患者中的作用。 

发明内容

本发明的目的在于提供树突状细胞联合细胞因子诱导杀伤细胞在肺癌治疗中的应用。 

在本发明的第一方面，提供一种用于缓解或治疗肺癌的细胞组合，包括： 

(a)致敏的DC细胞；该细胞如下制备：获取肺癌患者自身单个核细胞(较佳地，为黏附细胞)，在含有GM-CSF和IL-4的条件下培养，用SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽刺激，获得致敏的DC细胞；和 

(b)CIK细胞；该细胞如下制备：获取肺癌患者自身单个核细胞(较佳地，为非黏附细胞)，在含有IFN-γ的条件下培养，之后加入抗人CD3抗体和IL-2，获 得CIK细胞。 

在一个优选例中，(a)中，获取肺癌患者自身单个核细胞后，所述的单个核细胞如下处理：将肺癌患者自身单个核细胞置于容器中，静置使之形成两部分细胞，一部分黏附在容器壁上，一部分为悬浮细胞；分离其中的黏附细胞；和/或 

(b)中，获取肺癌患者自身单个核细胞后，所述的单个核细胞如下处理：将肺癌患者自身单个核细胞置于容器中，静置使之形成两部分细胞，一部分黏附在容器壁上，一部分为悬浮细胞；分离其中的非黏附细胞。 

在另一优选例中，(a)中，单个核细胞在含有1000±200单位/mL GM-CSF，500±100单位/mL IL-4的培养介质中培养。 

在另一优选例中，单个核细胞在含有1000±100单位/mL GM-CSF，500±50单位/mL IL-4的培养介质中培养。 

在另一优选例中，(a)中，细胞在含有GM-CSF和IL-4的条件下培养6-10天(较佳地8天)后，与SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽共孵育12±2小时(较佳地，12±1小时)。 

在另一优选例中，共孵育时，肽的浓度是10±2ug/ml。 

在另一优选例中，(b)中，单个核细胞在含有1000±100单位/mL IFN-γ的培养介质中培养24±5小时(较佳地24±3小时)，之后加入50±10ng/mL(较佳地50±5ng/mL)的抗CD3抗体，细胞每3±1天换液，换液时补充1000±200单位/mL IL-2，培养9±2天(较佳地9±1天)。 

在另一优选例中，单个核细胞在含有IFN-γ的培养介质中的细胞浓度是(1-10)×10⁶个细胞/ml；较佳地，为3×10⁶个细胞/ml。 

在本发明的另一方面，提供一种制备致敏的DC细胞的方法，该方法包括：获取肺癌患者自身单个核细胞(较佳地，为黏附细胞)，在含有GM-CSF和IL-4的条件下培养，用SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽刺激，获得致敏的DC细胞。 

在本发明的另一方面，提供一种制备CIK细胞的方法，该方法包括：获取肺癌患者自身单个核细胞(较佳地，为非黏附细胞)，在含有IFN-γ的条件下培养，之后加入抗CD3抗体和IL-2，获得CIK细胞。 

在本发明的另一方面，提供所述的细胞组合的用途，用于制备缓解或治疗肺癌的组合物。 

在另一优选例中，所述的肺癌是非小细胞肺癌。 

在本发明的另一方面，提供一种用于缓解或治疗肺癌的药盒，其中包括：