[发明专利]用于检测小鼠淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒的引物、探针及其方法

权利要求书

1.用于检测小鼠淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒的引物，其特征在于，所述引物是由具有序列表中的SEQ ID NO：1的上游引物与具有序列表中的SEQ ID NO：2的下游引物组成的一对寡核苷酸。

2.一种与权利要求1所述引物配合使用的探针，其特征在于，所述探针具有序列表中的SEQ ID NO：3的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的探针，其特征在于，所述探针5’端连接有荧光报告基团，3’端连接有荧光淬灭基团。

4.根据权利要求3所述的探针，其特征在于，所述荧光报告基团选自FAM、VIC、JOE、HEX中的任意一种，所述荧光淬灭基团选自TAMRA或Eclipse。

5.根据权利要求3所述的探针，其特征在于，所述荧光报告基团为FAM，所述荧光淬灭基团为TAMRA。

6.一种用于检测小鼠淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒的方法，其特征在于，所述方法使用权利要求1中所述的引物及权利要求2～5任一所述的探针进行实时荧光定量PCR检测。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的反应体系还包括RT-PCR扩增试剂、阳性RNA标准品、酵母tRNA稀释液、阴性质控品、空白对照。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的退火温度为60℃。

9.根据权利要求6～8任一所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的反应条件为：48℃，15min；95℃，10min；95℃，15sec，60℃，40sec，共40个循环。

10.根据权利要求6～9任一所述的方法，其特征在于，所述方法还包括标准曲线的建立，方法为：扩增含序列表中SEQ ID NO：4所示的碱基同源序列的pMD18-T载体，得到560bp的DNA片段，体外转录所述DNA片段并纯化获得的RNA作为阳性RNA标准品，将其十倍稀释成不同浓度的阳性定量标准品，以所述阳性定量标准品作为模板进行实时荧光定量PCR检测，得到检测小鼠淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒的标准曲线。

11.一种检测小鼠淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1中所述的引物及权利要求2～5任一所述的探针。

12.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应体系还包括RT-PCR扩增试剂、阳性RNA标准品、酵母tRNA稀释液、阴性质控品、空白对照。

13.根据权利要求12所述的试剂盒，其特征在于，所述RT-PCR扩增试剂为2×Taqman PCR Mix、40×Taqman RT-Enzyme MIX。

14.根据权利要求12或13所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性RNA标准品通过下述方法获得：扩增含序列表中SEQ ID NO：4所示的碱基同源序列的pMD18-T载体，得到560bp的DNA片段，体外转录所述DNA片段并纯化获得的RNA即标准品。

15.权利要求1中所述的引物或权利要求2～5任一所述的探针在检测鼠源生物制品中淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒残留时的应用。