[发明专利]3’硫代-2’脱氧核糖-3’硝基吡咯亚磷酰胺单体及其合成方法和应用

权利要求书

1.3’硫代-2’脱氧核糖-3’硝基吡咯亚磷酰胺单体，其特征在于结构为：

该分子由硝基吡咯基团、3’硫代脱氧核糖基团和亚磷酸基团构成，亚磷酸基团中连接R₁和R₂基团构成亚磷酰胺基团，脱氧核糖基团的5’羟基位置上连接着基团R₃，R₁选自于：R₂选自于：

-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂CN、-OC(CH₃)₂CH₂CN、-OC(CH₃)₂CCl₃、R₃选自于：

2.权利要求1所述的3’硫代-2’脱氧核糖-3’硝基吡咯亚磷酰胺单体的合成方法，其特征在于具有如下结构：

具体合成步骤为：

式2化合物1-(2’-脱氧-3’，5’-二-O-甲苯酰基-β-D-呋喃核糖)-3-硝基吡咯的合成：将2.20g，19.62mmol的3-硝基吡咯溶解于245mL乙睛中，在氮气气氛搅拌下加入0.66g，27.5mmol的氢化钠，当反应液变成清晰时，加入式1化合物：1-氯-2-脱氧-3’，5’-二-O-甲苯酰基-α-D-呋喃核糖7.62g，19.62mmol；将上述混合物搅拌1小时，过滤，固体物用乙睛洗涤，滤液蒸发至干，然后经硅胶柱色谱纯化，正己烷-丙酮作为洗提液，最后得到白色固体式2化合物；

式3化合物1-(2’-脱氧-3’，5’-β-D-呋喃核糖)-3-硝基吡咯的合成：将6.0g，12.92mmol的式2化合物放入溶解于甲醇的浓氨水溶液的压力容器中，55℃过夜，氨水和甲醇通过真空蒸发清除，固体物经硅胶柱色谱纯化分离，正己烷-丙酮作为洗提液，得到白色固体式3化合物3；

式4化合物1-(2’-脱氧-5’-二甲氧基三苯基-β-D-呋喃核糖)-3-硝基吡咯的合成：1.32g，5.80mmol的式3化合物和2.0g，5.92mmol的氯化对甲氧基三苯甲烷一同溶解在12mL吡啶中，室温放置1小时，然后不断加入氯化对甲氧基三苯甲烷，直到反应完全，然后将反应液倒入水中，产物用乙醚萃取，并用水洗涤3次，硫酸钠干燥，并用硅胶柱色谱纯化分离，正己烷-丙酮作为洗提液，得到白色泡沫式4化合物4；

2.50g，4.71mmol的式4化合物和17.7g，65.5mmol的硫代苯甲酸铯，溶于16.35mL无水二甲DMF中，加热到110℃反应5小时，反应完成后，溶剂真空脱出，用200毫升乙酸乙酯悬浮残余物，并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤3次，有机相用硫酸镁干燥，并在减压下蒸发溶剂得到浓缩物；750mg，2.67mmol硫代苯甲酸铯和200mg，0.77mmol的18-冠醚-6悬浮，在真空脱气、搅拌下溶于5毫升无水乙腈中，将浓缩物分批加入到上述乙腈溶液中搅拌反应2小时，产物冷着至室温后转移到分液漏斗中，用20mL体积比1∶1的乙酸乙酯和水萃取，有机相用硫酸钠干燥，过虑，并在减压下蒸发溶剂得到式5化合物：5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-3’苯甲酰-硫代-次黄嘌呤脱氧核苷；

1.98g，3.04mmol式5化合物在搅拌，同时伴随氩气鼓泡的作用下加入到400毫升乙醇和18.7mL，187mmol的NaOH混合溶液中室温反应1小时，然后将800mL，1M KH₂PO₄加入到反应液，沉淀物通过过虑、蒸馏水洗涤，并经用P₂O₅干燥48小时，得到式6化合物5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-3’巯基-次黄嘌呤脱氧核苷；

700mg，1.28mmol的式6化合物溶解在40毫升四氢呋喃、30mL甲醇和10mL水的溶剂中，在氩气保护下用冰的盐和甲醇冷着液冷至-10℃，加入脱气的0.5M，10mL氢氧化钠溶液，在0℃下搅拌10分钟；反应产物经减压浓缩至5毫升，加200毫升乙酸乙酯，用10％wt碳酸钠水溶液萃取3次，有机相用硫化钠干燥，过虑，真空干燥得到泡沫状固体，20毫升乙酸乙酯溶解上述泡沫状固体，并在搅拌下加入到250毫升正己烷中，放置于冷冻柜中冷至-78℃，沉淀物过虑分离，并在真空下干燥，得到式7化合物3’硫代-次黄嘌呤脱氧核苷亚磷酰胺分子。

3.权利要求1所述3’硫代-2’脱氧核糖-3’硝基吡咯亚磷酰胺单体在核酸、蛋白质生物大分子检测中的应用。