[发明专利]一种西索霉素发酵过程中补入种子液的方法

权利要求书

1.一种西索霉素发酵过程中补入种子的方法，它是以双种子发酵培养，生产较高和稳定的西索霉素发酵液，其特征在于包括如下步骤:

1、单种子发酵制备：将上一级的种子经过培养合格后移入下一级种子罐中培养，最终移入发酵罐中,工序如下：

1.1摇瓶种子的制备：摇瓶种子培养基经过灭菌冷却后，在无菌条件下，用接种针刮下斜面菌丝体于种子瓶中，置34±1℃摇床上培养40-48小时后，下摇床备用；

1.2一级种子的制备：一级种子培养基经过灭菌冷却后，在无菌条件下将摇瓶种子接入一级种子罐中34±1℃培养24-36小时；

1.3二级种子的制备：二级种子培养基经过灭菌冷却后，通过已灭菌过的移种管道将一级种子移入二级种子罐中培养，培养温度34±1℃，培养时间18-24小时；

1.4三级种子的制备：三级种子培养基经过灭菌冷却后，通过已灭菌过的移种管道将二级种子移入三级种子罐中培养，培养温度34±1℃，通气量1：1 v/v／min,培养时间18-24小时；

1.5发酵罐培养基的制备：发酵培养基经过灭菌冷却后，通过已灭菌过的移种管道将三级种子移入发酵罐中培养，培养温度34±1℃，通气量1：1 v/v／min,培养时间100-120小时;

2、备用种子的制备:间隔20-24小时重复制备步骤1中所述1.1到1.4的各级种子的制备，将培养好的备用种子移入步骤1中所述工序1.5已发酵培养20-24小时的发酵罐中再培养80-100小时；

3、半料培养基补入:上述步骤1中所述1.5中发酵液培养48小时后，补入半料培养;

4、无菌水的补入：上述1中所述1.5中发酵液培养80小时后，补入无菌水。

2.根据权利要求1所述的一种西索霉素发酵过程中补入种子的方法，其特征在于半料培养基补入优先选择48—55小时, 将已灭菌冷却后的半料培养基一次或多次性补入。

3.根据权利要求1所述的一种西索霉素发酵过程中补入种子的方法，其特征在于无菌水的补入优先选择81小时和88小时，将已灭菌冷却后的无菌水一次或多次补入。

4.根据权利要求1所述的一种西索霉素发酵过程中补入种子的方法，其特征在于各级培养基的组分如下：

1、摇瓶种子培养基组成：玉米淀粉0.8～1.2%、黄豆饼粉0.8～1.2%、酵母粉0.08～0.12%、硫酸镁0.03～0.07%，玉米浆0.03～0.07%、淀粉酶0.0008～0.0012%;

2、一级种子培养基组成：玉米淀粉2.8～3.2%、黄豆饼粉0.6～1.0%、玉米浆0.03～0.07%、酵母粉0.13～0.17%、硫酸镁0.03～0.07%、碳酸钙0.3～0.7%、淀粉酶0.00008～0.00012%、泡敌0.008～0.012%;

3、二级种子培养基组成：玉米淀粉5.8～6.2%、黄豆饼粉1.2～1.6%、酵母粉0.13～0.17%、硫酸镁0.03～0.07%、玉米浆0.03～0.07%、碳酸钙0.3～0.7%、氯化钴0.0003～0.0007%、淀粉酶0.00008～0.00012%、泡敌0.008～0.012%;

4、三级种子培养基组成：玉米淀粉5.8～6.2%、黄豆饼粉1.2～1.6%、酵母粉0.13～0.17%、玉米浆0.03～0.07%、硫酸镁0.03～0.07%、碳酸钙0.3～0.7%、氯化钴0.0003～0.0007%、淀粉酶0.00008～0.00012%、泡敌0.008～0.012%;

5、发酵培养基组成：玉米淀粉5.8～6.2%、黄豆饼粉1.8～2.2%、玉米浆0.03～0.07%、碳酸钙0.03～0.07%.、蛋氨酸0.003～0.007%.、氯化钴0.0003～0.0007%、淀粉酶0.00008～0.00012%、泡敌0.008～0.012%;

6、半料培养基组成：玉米淀粉2.8～3.2%、黄豆饼粉0.6～1.0%、玉米浆0.01～0.05%、碳酸钙0.01～0.05%、蛋氨酸0.001～0.005%、氯化钴0.0001～0.0005%、淀粉酶0.00003～0.00005%、泡敌0.008～0.012%。