[发明专利]一种西索霉素发酵过程中补入种子液的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种西索霉素发酵过程中补入种子的方法，它是以玉米淀粉、黄豆饼粉等为原材料，在微生物伊尼奥小单孢放线菌的作用下，种子经过三级扩大培养，在已发酵培养20—24小时的发酵罐中补入种子进行再发酵，当发酵培养48小时后，进行一次半料补入，当发酵培养80小时后，进行一次到二次的补水，来制备较高和稳定的西索霉素发酵液。

背景技术

西索霉素英文名:Sisomicin,分子式：C₁₉H₃₇N₅O₇,分子量：447.53，西索霉素为白色或类白色粉末，无臭，有引湿性。在水中易溶，在乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚中不溶,西索霉素常以盐酸盐存在。

西索霉素(Sisomicin, SISO) 是典型的次级代谢产物合成过程，是一种重要的含有双键的水溶性、多元弱碱性氨基糖苷类抗生素，属庆大霉素-西索霉素型的假三糖庆大霉胺类抗生素,为抗生素JI-20A的脱羟基化衍生物，西索霉素还是合成药物奈替米星(Netilmicin, NET)和新型化合物氢化西索霉素(即5′-差向庆大霉素C1a)的生产原料，中国生产的西索霉素约占世界产量的80%。

现有生产西索霉素发酵液的方法是以玉米淀粉、黄豆饼粉等为原材料，在微生物伊尼奥小单孢放线菌的作用下，多采用三级发酵，在发酵过程中进行适时补料生产西索霉素发酵液，利用薄层层析生物显影测定西索霉素效价，西索霉素的生物效价一般在700-1200ug∕ml，西索霉素主组份在70-80％，提取纯化收率只能达到50-60％，发酵周期长144小时左右。

现有生产西索霉素发酵液的方法，其不足之处在于：

1、西索霉素生产过程中发酵液生物效价较低，高低悬殊较大，生产不稳定，西索霉素的主组份不高，提取纯化收率低;

2、西索霉素生产过程中发酵周期较长，水、电等能源浪费，生产成本高。

发明内容

本发明一种西索霉素发酵过程中补入种子的方法，它是以玉米淀粉、黄豆饼粉等为原材料，在微生物伊尼奥小单孢放线菌的作用下，种子经过三级扩大培养，在已发酵培养20—24小时的发酵罐中补入种子进行再发酵，当发酵培养48小时后，进行一次半料补入，当发酵培养80小时后，进行一次到二次的补水，来制备较高和稳定的西索霉素发酵液。其目的在于克服上述的不足之处，提供一种能降低生产成本、又能提高西索霉素效价，利用在已发酵培养20—24小时的发酵罐中补入种子进行双种再发酵的方法。

本发明补入种子（即双种发酵法）进行发酵再培养后生产的西索霉素发酵液，解决了现有技术中存在的西索霉素效价高低不一的难题，提高了西索霉素的效价，效价稳定在1300-1500ug∕ml,西索霉素的主组份由现有技术的70-80％提高到了80-90％，提取纯化收率由现有技术的50-60％提高到了60-70％，西索霉素平均效价比现有技术提高了20％。本发明由于发酵周期缩短了24小时左右，发酵过程中水、电用量也就相应地得到减少，节约了能源，降低了生产成本。

本发明一种西索霉素发酵过程中补入种子的方法，它是以双种子发酵培养，生产较高和稳定的西索霉素发酵液。

本发明设计的各培养组成分别为：

1、摇瓶种子培养基组成：玉米淀粉0.8～1.2%、黄豆饼粉0.8～1.2%、酵母粉0.08～0.12%、硫酸镁0.03～0.07%，玉米浆0.03～0.07%、淀粉酶0.0008～0.0012%;

2、一级种子培养基组成：玉米淀粉2.8～3.2%、黄豆饼粉0.6～1.0%、玉米浆0.03～0.07%、酵母粉0.13～0.17%、硫酸镁0.03～0.07%、碳酸钙0.3～0.7%、淀粉酶0.00008～0.00012%、泡敌0.008～0.012%;

3、二级种子培养基组成：玉米淀粉5.8～6.2%、黄豆饼粉1.2～1.6%、酵母粉0.13～0.17%、硫酸镁0.03～0.07%、玉米浆0.03～0.07%、碳酸钙0.3～0.7%、氯化钴0.0003～0.0007%、淀粉酶0.00008～0.00012%、泡敌0.008～0.012%;

4、三级种子培养基组成：玉米淀粉5.8～6.2%、黄豆饼粉1.2～1.6%、酵母粉0.13～0.17%、玉米浆0.03～0.07%、硫酸镁0.03～0.07%、碳酸钙0.3～0.7%、氯化钴0.0003～0.0007%、淀粉酶0.00008～0.00012%、泡敌0.008～0.012%;