[发明专利]一种温敏型亲属螯合亲和沉淀剂的制备方法无效
| 申请号： | 201110344044.2 | 申请日： | 2011-11-03 |
| 公开（公告）号： | CN102391422A | 公开（公告）日： | 2012-03-28 |
| 发明（设计）人： | 朱利民;凌元清;聂华丽 | 申请（专利权）人： | 东华大学 |
| 主分类号： | C08F226/06 | 分类号： | C08F226/06;C08F220/06;C08F8/42;C07K1/32;C12N9/00 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达;谢文凯 |
| 地址： | 201620 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 温敏型 亲属 亲和 沉淀剂 制备 方法 | ||
1.一种温敏型亲属螯合亲和沉淀剂的制备方法，包括：
(1)将0.25～2.0g N-乙烯基己内酰胺与25～300μl甲基丙烯酸溶解在去离子水中，得混合液，然后将所述的混合液置于反应容器中，真空脱气，再加入0.1～0.60ml含有0.01～0.06g过硫酸铵的过硫酸铵水溶液，并调节体系pH值至7.0，通氮气鼓泡后密封后，在50～70℃反应1～3h；反应结束后加入氯化钠溶液沉淀，收集反应生成的沉淀，得到温敏聚合物PNVCL-co-MAA聚合物；
(2)用Tris-HCl缓冲液将上述温敏聚合物PNVCL-co-MAA配制成浓度为0.05～0.10g/ml的PNVCL-co-MAA的Tris-HCl缓冲液溶液，然后加入浓度为0.1～0.6mol/L硫酸铜溶液，在室温下振荡反应0.5～2h，收集反应生成的沉淀，得到亲和温敏聚合物PNVCL-co-MAA-Cu，即为该温敏型亲属螯合亲和沉淀剂。
2.根据权利要求1所述的一种温敏型亲属螯合亲和沉淀剂的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的N-乙烯基己内酰胺的质量为0.5～1.5g，甲基丙烯酸的用量为50～150μl。
3.根据权利要求1所述的一种温敏型亲属螯合亲和沉淀剂的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的真空脱气是时间为10～30min，氮气鼓泡的时间为15～30min。
4.根据权利要求1所述的一种温敏型亲属螯合亲和沉淀剂的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所加入的过硫酸铵水溶液中过硫酸铵的含量为0.03～0.05g。
5.根据权利要求1所述的一种温敏型亲属螯合亲和沉淀剂的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的调节体系pH值至7.0为采用浓度为1mol/L的氢氧化钠水溶液调节；所述的氯化钠溶液的浓度为0.2mol/L。
6.根据权利要求1所述的一种温敏型亲属螯合亲和沉淀剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述的Tris-HCl缓冲液为0.05mol/L、pH值为4.0～8.0的Tris-HCl缓冲液。
7.根据权利要求6所述的一种温敏型亲属螯合亲和沉淀剂的制备方法，其特征在于：所述的Tris-HCl缓冲液的pH值为5.0～7.0。
8.根据权利要求1所述的一种温敏型亲属螯合亲和沉淀剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所加入的硫酸铜溶液浓度为0.2～0.4mol/L，室温反应时间为1～1.5h。
9.根据权利要求1所述的一种温敏型亲属螯合亲和沉淀剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述的硫酸铜溶液与PNVCL-co-MAA的Tris-HCl缓冲液溶液的体积比为5～10∶5～10。
10.根据权利要求1所述的一种温敏型亲属螯合亲和沉淀剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所得的温敏型亲属螯合亲和沉淀剂应用于牛血清蛋白BSA的亲和沉淀纯化。
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