[发明专利]从诸葛菜中提取抗菌肽的方法有效
| 申请号： | 201110345856.9 | 申请日： | 2011-11-07 |
| 公开（公告）号： | CN102382183A | 公开（公告）日： | 2012-03-21 |
| 发明（设计）人： | 周丽蓉;陈文清;冯雷 | 申请（专利权）人： | 四川大学 |
| 主分类号： | C07K14/415 | 分类号： | C07K14/415;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18;C07K1/16 |
| 代理公司： | 成都立信专利事务所有限公司 51100 | 代理人： | 冯忠亮 |
| 地址： | 610065 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 诸葛 提取 抗菌 方法 | ||
1.从诸葛菜中提取抗菌肽的方法，其特征在于如下步骤：
（1）将诸葛菜研磨成浆，加入可溶蛋白提取缓冲液，在3—5℃浸提、过滤、离心分离滤液，弃沉淀，取上清液；
（2）将上清液边搅拌边加入（NH4）2SO4至饱和度35—45%、3—5℃静置、离心分离，再得上清液，再加入（NH4）2SO4至饱和度75—85%，静置，离心分离，将沉淀溶于离子交换层析缓冲液Ⅰ中透析，得到蛋白质粗提液；
（3）离子交换层析，将蛋白质粗提液上预先用洗脱液平衡好的离子交换层析柱，用离子交换层析缓冲液Ⅰ淋洗至基线，再用离子交换层析缓冲液Ⅱ进行洗脱，检测抑菌活性收集活性组分；
（4）将上述所得活性组分用离子交换层析缓冲液Ⅰ透析，再用凝胶过滤缓冲液作透析，再抽真空浓缩，将浓缩液上分子筛层析柱，用凝胶过滤缓冲液洗脱，检测抑菌活性，收集活性组分，将活性组分冷冻干燥得抗菌活性干粉。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于离子交换层析缓冲液Ⅰ为20mol/L pH6.2磷酸缓冲液，离子交换层析缓冲液Ⅱ为每升离子交换层析缓冲液Ⅰ中加入1mol NaCl，洗脱液和凝胶过滤缓冲液为50mol/L pH7.0磷酸缓冲液加0.1mol/L NaCl，可溶蛋白提取缓冲液为50mol/L pH7.0磷酸缓冲液加0.1mol/L KCl和2mM EDTA，离子交换层析柱为CM—52；分子筛层析柱为SephadexG—50。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的诸葛菜为其茎和叶。
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