[发明专利]一种标记3,3’-二碘甲腺氨酸硫酸化物的方法及检测试剂盒

权利要求书

1.发光微粒标记3,3’-T₂S的方法，3,3’-二碘甲腺氨酸硫酸化物简称3,3’-T₂S，其特征在于：在离心管中加入1mg发光微粒，加入12.5μL质量浓度1% Tween-20，0.05mg 3,3’-T₂S，和10μL的25mg/mL硼氢化氰钠溶液，用pH6.0、0.1M的2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲液将体积补充到200μL，37℃避光振荡反应48小时，加入10μL  pH 5.0、0.3M的羧甲氧基胺半盐酸盐溶液封闭未结合位点，37℃避光孵育1小时，离心纯化，洗去未反应的试剂后，分离得到包被有3,3’-T₂S的发光微粒，即为用发光微粒标记的3,3’-T₂S，稀释后备用。

2.一种3,3’-T₂S的检测试剂盒，其特征在于应用了权利要求1所述方法制备的包被有3,3’-T₂S的发光微粒，该检测试剂盒由白色不透明微孔板（1），3,3’-T₂S标准品（2），包被有3,3’-T₂S的发光微粒（3），兔抗3,3’-T₂S抗体冻干品（4），生物素化羊抗兔抗体冻干品（5），和包被有链霉亲和素的感光微粒（6）组成。

3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于3,3’-T₂S标准品（2）的配制：3,3’-T₂S标准品浓度分别为：0 pg/mL，10 pg/mL，100 pg/mL，500 pg/mL，1000 pg/mL，5000 pg/mL，从3,3’-T₂S纯品中稀释得到，稀释液为30%乙醇溶液。

4.一种用权利要求2所述的检测试剂盒检测3,3’-T₂S的方法，其特征在于取包被有3,3’-T₂S的发光微粒加入到白色不透明微孔板；加入3,3’-T₂S标准或处理好的样品到各自的微孔中，然后各孔顺序加入兔抗3,3’-T₂S抗体、生物素化羊抗兔抗体进行标记免疫反应；接着在避光处加入包被有链霉亲和素的感光微粒进行反应，反应后检测光信号，对照标准曲线计算被测样品中的3,3’-T₂S含量。

5.根据权利要求4所述的检测3,3’-T₂S的方法，其特征在于操作为：取20μL包被有3,3’-T₂S的发光微粒加入到白色不透明微孔板；加入20μL的3,3’-T₂S标准或处理好的样品到各自的微孔中；加20μL兔抗3,3’-T₂S抗体；继续加入20μL生物素化羊抗兔抗体，37℃孵育15分钟；避光处加175μL包被有链霉亲和素的感光微粒，37℃暗处孵育15分钟，反应后在光激化学发光检测仪上检测光信号，从标准曲线计算被测样品中的3,3’-T₂S含量。