[发明专利]一种标记3,3’-二碘甲腺氨酸硫酸化物的方法及检测试剂盒

说明书

技术领域

一种标记3,3’-二碘甲腺氨酸硫酸化物（3,3’-T₂S）的方法及检测试剂盒，属于光激化学发光免疫分析（LICLIA）技术领域，用于对妊娠妇女血清中3,3’-T₂S含量的检测。

背景技术

先天性甲状腺功能减低症，简称先天性甲减，是由于胚胎期和出生前在某些病因的作用下引起的甲状腺轴的发生、发育和功能代谢出现异常，引起甲状腺功能减低，严重地影响到中枢神经系统和体格等的发育。

目前胎儿期的甲减筛查还是个世界性难题。对此，国内外一些学者对胎儿甲状腺功能的检测做了不少研究。

已有大量实验显示3,3’-T₂S与胎儿甲状腺激素代谢有密切关系，3,3’-T₂S是胎儿甲状腺激素的代谢物，经胎盘溢出到母体一侧，造成母体血中其浓度升高，因此，孕妇血清和尿中的3,3’-T₂S浓度可以反映胎儿甲状腺激素的水平，间接反映胎儿甲状腺功能状态。目前3,3’-T₂S的RIA检测方法十分繁琐、复杂和耗时，RIA进行标记时标记物为¹²⁵I，由于标记时会形成的T₂S、T₃S与T₄S，因此分离纯化的过程繁琐及复杂，且放射性碘的半衰期较短，标记物放置后因衰变使放射性降低，因而需要经常制备标记物，另外放射性核素对环境保护及工作人员健康都带来不利影响；RIA操作时，整个检测的反应时间达48小时，而且方法很难自动化，等等，这些限制了3,3’-T₂S检测的应用，从而限制了其在胎儿和新生儿甲状腺功能筛查中的价值。

光激化学发光免疫分析（LICLIA）是以纳米级高分子微粒为基础的新一代化学发光技术，该项技术将被广泛地应用于研究生物分子的相互作用。LICLIA技术的核心原理是单线态氧的产生和传递。在受到红色激光（680 nm）照射后，感光微粒能使周围环境中的氧转化为单线态氧，单线态氧的生存时间仅为4微秒。短暂的生存时间决定了单线态氧的传播直径很小（约为200 nm）。如果发光微粒在200 nm范围之内就能接受单线态氧，并发出高能级的光（520nm - 620nm）。相反，如果在200 nm直径范围内没有发光微粒，单线态氧就会回落到基态氧而没有信号产生。这种依赖于两种微粒相互接近的化学能量传递是LICLIA均相反应的基础。通常在该反应体系中，微粒的浓度是很低的。两种微粒相互随机碰撞的几率很低，因此，反应体系的本底非常微弱。如果包被在微粒表面的生物分子相互作用，拉近了两个微粒的距离，例如形成免疫夹心复合物，这样就能产生能量的有效传递并发出光信号。

发明内容

本发明的目的在于提供一种标记3,3’-二碘甲腺氨酸硫酸化物（3,3’-T₂S）的方法及检测试剂盒，用于对妊娠妇女血清中3,3’-T₂S含量的检测。

本发明的技术方案： 

发光微粒标记3,3’-T₂S的方法：在离心管中加入1mg发光微粒，加入12.5 μL 质量浓度1% Tween-20，0.05 mg 3,3’-T₂S，10μL的25mg/mL硼氢化氰钠溶液，用pH6.0、0.1M的2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲液将体积补充到200μL，37℃避光振荡反应48小时，加入10μL pH 5.0、0.3M的羧甲氧基胺半盐酸盐溶液封闭未结合位点，37℃避光孵育1小时，离心纯化，洗去未反应的试剂后，分离得到包被有3,3’-T₂S抗原的发光微粒，即为用发光微粒标记的3,3’-T₂S，稀释后备用。

一种3,3’-二碘甲腺氨酸硫酸化物（3,3’-T₂S）的检测试剂盒，由白色不透明微孔板1，3,3’-T₂S标准品2，包被有3,3’-T₂S的发光微粒3，兔抗3,3’-T₂S抗体冻干品4，生物素化羊抗兔抗体冻干品5，和包被有链霉亲和素的感光微粒6组成。

3,3’-T₂S标准品2的配制：3,3’-T₂S标准品浓度分别为：0 pg/mL，10 pg/mL，100 pg/mL，500 pg/mL，1000 pg/mL，5000 pg/mL，从3,3’-T₂S纯品中稀释得到，稀释液为30%乙醇溶液。