[发明专利]一种鸡传染性支气管炎病毒HA抗原的制备方法

权利要求书

1.一种鸡传染性支气管炎病毒HA抗原的制备方法，其特征在于：该方法是按下述步骤进行的：

(1)病毒增殖

将病毒株用无菌生理盐水按体积比1∶50倍稀释后，经尿囊腔接种11日龄SPF鸡胚，每胚0.1mL，置37℃继续孵育，弃去24h前死胚，36h后取出所有胚放入4℃冰箱过夜，收集尿囊液，4℃保存备用；

(2)病毒液浓缩与A型产气荚膜梭菌培养液处理

将收集的尿囊液以3000-5000rpm高速冷冻离心30min，取上清液以20000-25000rpm高速冷冻离心50-60min后，弃去上清液，沉淀用支气管尿囊液充分悬浮，支气管尿囊液的添加量是第一次离心后所取上清液体积的1/200-1/100，悬浮液用透析袋进行浓缩；然后按浓缩后液体体积的10％-50％加入产气荚膜梭菌培养液，充分混合后置37℃水浴作用2-3h，每隔20min震荡一次，作用完毕后取出病毒液置4℃保存备用；

(3)抗原的灭活

(4)抗原的稳定

按病毒液与稳定剂体积比3-10∶1的比例加入稳定剂，震荡混匀后利用冷冻干燥技术冻干后即得到鸡传染性支气管炎病毒HA抗原；

(5)使用鸡红细胞悬液进行抗原测定，并于4℃中判定。

2.根据权利要求1所述的鸡传染性支气管炎病毒HA抗原的制备方法，其特征在于：所述的病毒毒株为M41。

3.根据权利要求1所述的鸡传染性支气管炎病毒HA抗原的制备方法，其特征在于产气荚膜梭菌培养液按以下方法制备：将产气荚膜梭菌菌株以3％的接种量接种于厌气肉肝汤培养基后，放入37℃温箱中培养24小时培养液以5000r/min离心30分，取上清液经0.22μm微孔滤器过滤后分装即得，-20℃保存。

4.根据权利要求1所述的鸡传染性支气管炎病毒HA抗原的制备方法，其特征在于：所述的病毒经上述步骤(2)处理后4℃要放置7天。

5.根据权利要求1所述的鸡传染性支气管炎病毒HA抗原的制备方法，其特征在于：所述的灭活是将病毒液置56℃水浴灭活30min。

6.根据权利要求1所述的鸡传染性支气管炎病毒HA抗原的制备方法，其特征在于：所述的稳定剂为N-2羟丙基三甲基氯化氨壳聚糖。

7.根据权利要求1所述的鸡传染性支气管炎病毒HA抗原的制备方法，其特征在于：所述的鸡红细胞悬液浓度为0.5％。