[发明专利]西罗莫司粗晶的制备方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种药物的制备方法，尤其涉及一种西罗莫司粗晶的制备方法。

【背景技术】

西罗莫司(sirolimus)又称雷帕霉素(rapamycin)，1975年，由加拿大Ayerst实验室的Vezina等人从太平洋Easler岛土壤样品中分离的吸水链霉菌(Streptomyees hygroscopicus)发酵液中首次得到。西罗莫司是一种亲脂性含氮36元大环内酯类抗生素，分子式C₅₁H₇₉NO₁₃，分子量914.2，其结构式如下：

1977年Morris等人首先发现西罗莫司具有免疫抑制作用，1989年开始把西罗莫司作为治疗器官移植的排斥反应的新药进行使用。它是目前世界上最新的强效免疫抑制剂，它的免疫抑制活性比现行临床广泛使用的环孢素强数十倍，不但毒性低、用量小，而且与环孢素有协同免疫抑制作用，在临床上西罗莫司与环孢素联合使用。与环孢素和FK506(他克莫司)相比，西罗莫司是一种疗效好、低毒、无肾毒性的免疫抑制剂。1991年，在酵母中发现了雷帕霉素的作用靶点并命名为“雷帕霉素靶点(TOR)”。其在哺乳动物中发现的唯一的同质体后来被克隆，称为“哺乳类动物雷帕霉素靶点(mTOR)”。现在雷帕霉素不但作为器官移植抗排斥药物和治疗冠状动脉再狭窄的支架涂层在临床上应用，而且已经在实验室中被证实可抑制许多癌细胞的生长，包括横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、肺小细胞癌、骨癌、胰脏癌、白血病癌细胞及B细胞淋巴癌等。西罗莫司具有异构体B和异构体C，其中异构体B为主要活性成分，两种异构体的结构式如下：

异构体B                            异构体C

目前，西罗莫司主要由发酵的方法获得，所得产物为黑褐色浓缩物，产物中除含有西罗莫司外还含未利用完的培养基、酸性化合物(如脂肪酸)、碱性物质(如生物碱，多肽，中性脂肪等脂溶性化合物)以及无机盐等。西罗莫司在上述产物中的含量较低，一般从发酵液中提取到的黑褐色浓缩物为粘稠状，其中所含西罗莫司的量低于20％，高效液相色谱(HPLC)测定纯度低于85％，异构体B∶异构体C的比例低于10∶1。西罗莫司在液体状态下易降解，在粘稠状浓缩物中也不利于保存和运输，因而人们一般都是将发酵所得的黑褐色浓缩物马上纯化成纯度较高的西罗莫司晶体，以方便保存和运输。然而黑褐色浓缩物要纯化成西罗莫司晶体须经过柱层析等一系列繁杂的工序，才能得到西罗莫司晶体。

本发明提供了一种不需要繁杂工序即可制得西罗莫司粗晶的方法，且目前市场上未见西罗莫司粗晶形式的产品。

【发明内容】

本发明所要解决的技术问题在于提供一种西罗莫司粗晶的制备方法，不仅操作简单，而且极大程度地提高了西罗莫司的纯度和含量，提高了西罗莫司中异构体B与异构体C的比值。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：一种西罗莫司粗晶的制备方法，将西罗莫司菌丝体的浸提液采用下述步骤进行操作：

(1)吸附：将西罗莫司菌丝体的浸提液减压浓缩成浓缩物，接着浓缩物中加入固体吸附剂，并搅拌、静置，然后倾沥除去液体得到残余物，其中，固体吸附剂加入量以所述浸提液的体积为标准，每升浸提液加入0.001～0.005kg固体吸附剂；

(2)萃取：加入浸提液体积的0.05～0.5倍的有机溶剂至经过(1)处理所得的残余物中，并搅拌，然后过滤或离心除去固体，再将所得溶液静置以使溶液分为水、有机溶液两层，并除去水层以获得有机溶液；

(3)洗涤浓缩：加入饱和食盐水至经过(2)处理所得有机溶液中，饱和食盐水与有机溶液的体积比为0.1～1∶1，对有机溶液进行洗涤，并除去水层，得到剩余物；再加无水硫酸钠至上述剩余物中干燥3小时，然后过滤以获得滤液，最后将滤液减压浓缩，得黑褐色油状物；

(4)洗涤：加非极性溶剂至经过(3)处理所得的油状物中，并搅拌、静置，然后除去非极性溶剂以获得残留物，其中，非极性溶剂与油状物的体积比为0.5～3∶1；

(5)结晶：加结晶溶剂至经过(4)处理所得的残留物中，并搅拌溶解，即获得西罗莫司溶液，结晶溶剂与所述残留物的体积比为0.5～3∶1；接着将西罗莫司溶液在室温下放置2～10h，然后过滤除去液体，得到西罗莫司晶体；

(6)洗晶干燥：用所述结晶溶剂洗涤(5)中获得的西罗莫司晶体三次，然后将洗涤后的西罗莫司晶体置于45℃下减压干燥4h，即得产品；