[发明专利]基于腺相关病毒的山羊β-乳球蛋白基因打靶质粒的构建及其打靶方法无效
| 申请号： | 201110350437.4 | 申请日： | 2011-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN103088062A | 公开（公告）日： | 2013-05-08 |
| 发明（设计）人： | 肖磊;赵金龙 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海生命科学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/864 | 分类号： | C12N15/864;C12N7/00 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 陈静 |
| 地址： | 200031 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 相关 病毒 山羊 球蛋白 基因 打靶 质粒 构建 及其 方法 | ||
1.一种基于腺相关病毒为载体的山羊β-乳球蛋白基因打靶质粒，其特征在于，所述质粒具有如下的序列：5’AAV，左臂，人乳铁蛋白cDNA，loxp-ef1a-neo-pA-loxp，核糖体插入序列(IRES)，右臂3’。
2.如权利要求1所述的质粒，其特征在于，所述质粒的载体是将pAAV-MCS质粒的反向重复序列旁的Not I位点通过PCR的方法更改为BamH I位点获得。
3.如权利要求1所述的质粒，其特征在于，所述质粒除载体外的插入片段的基因顺序为：5’左臂，人乳铁蛋白cDNA，loxp-ef1a-neo-pA-loxp，核糖体插入序列(IRES)，右臂3’。
4.如权利要求3所述的左臂，其特征在于，所述左臂的序列为山羊基因组中β-乳球蛋白基因从翻译起始密码子ATG到上游366bp之间的序列。
5.如权利要求3所述的右臂，其特征在于，所述右臂的序列为山羊基因组中β-乳球蛋白基因从翻译起始密码子ATG到下游380bp之间的序列。
6.如权利要求3所述的插入片段，其特征在于，所述插入片段具有如SEQ ID NO：1所示的序列。
7.一种基于腺相关病毒为载体的山羊β-乳球蛋白基因打靶质粒的打靶方法，其特征在于包括以下步骤：
A、将权利要求1中所述的质粒与pAAV-RC，pHelper共同转染AAV-293细胞以包装病毒；
B、用上述获得的病毒感染山羊细胞24小时；
C、加G418筛选感染成功的细胞。
8.如权利要求7所述的山羊细胞，其特征在于，所述山羊细胞为山羊iPS细胞。
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