[发明专利]一种奥曲肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及化合物合成领域，特别涉及一种奥曲肽的制备方法。

背景技术

奥曲肽，化学名为D-苯丙氨酰-L-半胱氨酰-L-苯丙氨酰-D-色氨酰-L-赖氨酰-L-苏氨酰-L-半胱氨酰-L-苏氨醇环-(2→7)-二硫化物醋酸盐，为分子内含有一个二硫键的环八肽是天然生长抑素的类似物，其化学式为C₄₉H₆₆N₁₀O₁₀S₂，分子量为1019.24，其结构简式如式Ⅰ所示：

奥曲肽的化学式如式Ⅱ所示：

奥曲肽有多种生理活性，如抑制生长激素、促甲状腺素、胃肠道和胰内分泌激素的病理性分泌过多，对胃酸、胰酶、胰高血糖素和胰岛素的分泌也有抑制作用，能降低胃运动和胆囊排空，抑制胆囊排空，抑制缩胆囊素一胰酶泌素的分泌，减少胰腺分泌，对胰腺实质细胞膜有直接保护作用；奥曲肽还可抑制胃肠蠕动，减少内脏血流量和降低门脉压力，减少肠道过度分泌，并可增强肠道对水和Na⁺的吸收。临床可用于治疗门脉高压引起的食管静脉曲张出血、应激性溃疡及消化道出血、重型胰腺炎、缓解由胃、肠及胰内分泌系统肿瘤所引起的症状、突眼性甲状腺肿和肢端肥大症、胃肠道瘘管等。1988年美国FDA批准醋酸奥曲肽用于胃肠道分泌类肿瘤和垂体肿瘤及肢端肥大症的治疗；1998年美国FDA再次批准醋酸奥曲肽用于肢端肥大症的治疗。

瑞士山德士(Sandoz)公司于1982年首次合成奥曲肽，近些年，研究者不断提出新的合成方法，以提高奥曲肽的收率和纯度。专利CN1355173A中采用3+5片段缩合法，但是片段5的损失率较高；专利US 4395403中采用Boc法合成，2+6片段缩合制备得到线性奥曲肽，但是片段6的损失率较高；专利CN1810829A中采用固相合成法采用Fmoc法合成线性奥曲肽，最后将末端Fmoc基团脱掉再裂解得到线性粗肽；专利CN1923849B采用1+7片段缩合法，且(D)Phe-OH采用Boc保护基保护，但是奥曲肽的收率较低，纯度不高。因此，提供一种收率较高、纯度较好的奥曲肽的制备方法，具有现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种奥曲肽的制备方法。该制备方法将二肽与六肽树脂通过缩合制得线性八肽，溶于过量的N，N-二甲基甲酰胺的水溶液中，加入氧化剂环化、纯化后制得奥曲肽，提高了奥曲肽的收率及纯度。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种奥曲肽的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：获得氨基酸序列为D-Phe-Cys的二肽；

以树脂为载体，按照固相法合成六肽树脂；所述六肽树脂中氨基酸残基序列为Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr；

在碱性条件下，取所述二肽与所述六肽树脂发生缩合反应，切肽制得线性八肽；所述线性八肽的氨基酸残基序列为D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr；

步骤2：取所述线性八肽溶于过量的N，N-二甲基甲酰胺的水溶液中，调整pH值为6.8～8.0，加入过量的氧化剂，在18～30℃环化2～3h，调整pH值为3.5～5.0，纯化后，制得结构如式Ⅰ所示的奥曲肽；

其中，Thr-ol是苏氨醇，Cys是半胱氨酸，Thr是苏氨酸，Lys是赖氨酸，D-Trp是D型色氨酸，Phe是苯丙氨酸，D-Phe是D型苯丙氨酸。

本发明提供的奥曲肽的制备方法中，所述环化具体可以为：

取所述线性八肽溶于体积分数为50～90％的DMF水溶液中，线性八肽在DMF水溶液中的浓度优选为为15～30mmol/L，调整pH值至6.8～8.0，优选用稀释5倍的氨水调节pH值，再加入过量的氧化剂，优选为稀释5倍的双氧水，氧化剂与线性八肽的摩尔比为5～10∶1，室温搅拌反应2～3h，HPLC监测环化完全后，调整溶液pH值至3.5～5.0，优选为使用冰乙酸调节pH值，反应结束得到奥曲肽粗肽溶液；

作为优选，步骤2中所述N，N-二甲基甲酰胺的水溶液中N，N-二甲基甲酰胺的体积分数为50～90％。

优选地，步骤2中以mmol/L计，所述线性八肽与所述N，N-二甲基甲酰胺(DMF)的水溶液的摩尔体积比为15～30∶1。

作为优选，步骤2中所述氧化剂为过氧化氢或碘乙醇溶液中的一种或两者的混合物。