[发明专利]一种微生物发酵转化生产甘草次酸的方法

权利要求书

1.一种微生物发酵转化生产甘草次酸的方法，其特征是，所述的微生物 为黄曲霉Aspergillus flavus，CGMCC No.5144。

2.如权利要求1所述的微生物发酵转化生产甘草次酸的方法，其特征是， 包括以下步骤：

步骤一、将黄曲霉Aspergillus flavus，CGMCC No.5144接入固体PDA斜面 培养基中培养，然后从斜面上按1％的接种量接种至新鲜种子培养基中进行培 养；

步骤二、将处于生长期中的经种子培养基培养的菌种按照30％的接种量 接种至含新鲜发酵培养基的发酵罐中进行发酵培养，发酵产生含甘草次酸的 发酵液。

3.如权利要求1所述的微生物发酵转化生产甘草次酸的方法，其特征是， 在步骤二之后还包括步骤三：然后从发酵液中分离出甘草次酸粗品，并进行 纯化。

4.如权利要求2所述的微生物发酵转化生产甘草次酸的方法，其中，步 骤一中种子培养基的质量百分组成为：玉米糖化液0.5～1.5％，麸皮汁4.5～ 5.5％，酵母膏0.5～0.7％，硫酸铵0.05～0.15％，硫酸镁0.04～0.06％，磷酸 二氢钾0.09～0.11％，甘草酸粗品0.09～0.11％，其余为水。

5.如权利要求4所述的微生物发酵转化生产甘草次酸的方法，其中，步 骤一中种子培养基培养条件为：菌株放置到锥形瓶中于转速200rpm的摇床上 振摇培养，通气量0.2m³/h，培养时间24小时。

6.如权利要求2所述的微生物发酵转化生产甘草次酸的方法，其中，步 骤二中发酵培养基的质量百分组成：为甘草酸0.8～1.2％，硫酸铵0.8～1.0％， 硫酸镁0.03～0.05％，磷酸氢二钾0.6～0.8％，磷酸二氢钾0.7～0.9％，其余 为水，初始pH4～5。

7.如权利要求6所述的微生物发酵转化生产甘草次酸的方法，其中，步 骤二中发酵罐中发酵培养条件为：发酵培养基50～70L，发酵温度20～40℃， 通气量0.3～0.5m³/h，搅拌速度为130～170rmp，发酵2～4d。

8.如权利要求3所述的微生物发酵转化生产甘草次酸的方法，其中，甘 草次酸的分离包含以下步骤：

通过滤布过滤，收集滤液1，然后将所得滤液1通过超滤膜PES-20，截 流粒径在10nm以上，分子量在500～500000范围内的物质，收集滤液2；

采用纳滤膜NF-270过滤上步骤所得滤液2，截流分子量在200～1000左 右的低分子物质，收集滤液3。

9.如权利要求3所述的微生物发酵转化生产甘草次酸的方法，其中，甘 草次酸的纯化包含以下步骤：

先通过大孔吸附树脂H103对所述滤液3进行分离纯化，得到甘草次酸粗 品；

然后将所得甘草次酸的粗品制成样品胶后水平安置于硅胶柱表面，先用 纯石油醚通柱，再用石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1(体积比)的流动相每次20目洗 脱甘草次酸，收集滤液并进行喷雾干燥、分步收集，最后得到甘草次酸纯品。

10.如权利要求1所述的微生物发酵转化生产甘草次酸的方法，其中， 黄曲霉Aspergillus flavus，CGMCC No.5144为通过紫外线和Licl复合诱变处理 葡萄糖醛酸的曲霉属黄曲霉获得。