[发明专利]一种嗜盐曲霉菌F1及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说是一种嗜盐曲霉菌F1及其应用。 

背景技术

细胞松弛素类化合物是一类由真菌代谢产生的毒素，它们中有一些具有显著的生物学活性，如抑制哺乳动物细胞分裂、抑制HIV-1蛋白酶、抗菌和抗肿瘤等活性。细胞松弛素因为具有改变细胞微结构的作用，因此成为细胞生物学中细胞微结构和功能研究的常用工具，用于探讨细胞分裂、细胞运动和吞噬、细胞核和质的关系和细胞生物合成等生命活动。 

细胞松弛素类化合物Rosellichalasin，Cytochalasin E分别对大肠杆菌，假单胞菌，白色念珠菌都有一定的抑制作用。Cytochalasin E是目前国内外应用较为广泛的细胞松弛素类化合物，它作为动植物细胞结构和功能研究的常用工具，表现出独特的选择多样性，尤其是，它作为一种血管生成抑制剂，并不抑制葡萄糖的转运，这一点是其它细胞松弛素类化合物所不具备的。据文献报道，Cytochalasin E在浓度为10^-9-10^-6mol/L时，通过抑制肌动蛋白的聚合来抑制肿瘤细胞的增殖，在浓度为10^-14-10^-9mol/L时，通过其它途径来抑制肿瘤细胞的增殖。Cytochalasin E有望被用来治疗与血管生成相关的癌症和老年性黄斑退化病。由于Cytochalasin E结构复杂，难以人工合成，并且目前细胞松弛素类工具化合物多为进口产品，商品价格偏高，因此，开发具有我国自主知识产权的高产Cytochalasin E微生物菌株显得尤为必要。 

发明内容

本发明的目的在于提供嗜盐曲霉菌F1及其应用。 

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为： 

一种嗜盐曲霉菌F1(Aspergillus sp.F1)，保藏于中国典型培养物保藏中心(中国武汉大学内)，保藏号为：CCTCC NO：M 2011277，保藏日期为：2011年8月4日。 

嗜盐曲霉菌F1的应用，将所述嗜盐曲霉菌F1发酵培养于F1的液体发酵培养基中发酵培养，所得发酵物经纯化分离即得到细胞松弛素类化合物Rosellichalasin和Cytochalasin E。 

将所述嗜盐曲霉菌F1发酵培养于F1的液体发酵培养基中于28-30℃静止发酵培养25-30天所得发酵物经纯化分离即得到细胞松弛素类化合物Rosellichalasin和Cytochalasin E。 

所述发酵物经纯化分离为将发酵培养后的发酵物的菌丝体和发酵液过滤分离，将菌丝体用其2倍体积乙醇浸提4-5次，再用过量的乙酸乙酯萃取10-15次，将乙酸乙酯萃取液减压浓缩，得粗浸膏，然后采用硅胶柱层 析、重结晶和Sephadex LH-20凝胶柱层分离纯化，即分别得到Rosellichalasin和Cytochalasin E。 

将所述浸膏用乙酸乙酯溶剂溶解后，加200-300目硅胶搅拌，减压除去溶剂后，用硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯为溶剂进行梯度洗脱，洗脱速率20ml/min，收集石油醚-乙酸乙酯比例为2∶1(v/v)洗脱液，经TLC检测收集Rf＝0.575组分，洗脱组分减压浓缩至干，再在正己烷-乙酸乙酯比例为1∶1(v/v)中重结晶，收集无色针状晶体Rosellichalasin； 

或收集石油醚-乙酸乙酯比例为1∶2(v/v)洗脱液，经TLC检测收集Rf＝0.35组分，洗脱组分减压浓缩至干，再在己烷-丙酮比例为1∶1中重结晶，收集无色针状晶体Cytochalasin E； 

将上述所得无色针状晶体分别经Sephadex LH-20柱层析，用甲醇洗脱，洗脱速率为，5ml/min，洗脱液减压浓缩至干，分别得白色无定形物。 

所述石油醚-乙酸乙酯梯度为100∶0-0∶100(v/v)；正己烷-乙酸乙酯比例为1∶1(v/v)；己烷-丙酮比例为1∶1(v/v)。所述嗜盐曲霉菌F1的液体发酵培养基成分为：葡萄糖2.0％(W/V)，海盐6.0％(W/V)，马铃薯200克，加适量水煮沸30分钟，4层纱布过滤，滤液用蒸馏水定容至1升。 

本发明所具有的优点：