[发明专利]干酪乳杆菌N1115、其免疫调节作用及应用

权利要求书

1.一种干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）N1115，是从内蒙古发酵乳制品中分离出的耐酸和耐胆盐的益生菌；该菌菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏编号：CGMCC No.4691。

2.如权利要求1所述的干酪乳杆菌N1115的分离纯化方法，其特征在于它按照如下步骤顺序进行：

①样品采集

取25mL内蒙古发酵乳制品，加入到250mL 生理盐水中，充分混匀，得到样品；

②样品的富集

取样品2mL，加入到100mL 的LC液体培养基中，35℃培养72h，得到培养液；

③菌株分离

取培养液1mL，用重量与体积的百分比为0.9%的无菌生理盐水稀释100000倍，分别为梯度稀释10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5倍，得到菌悬液；

取MRS琼脂培养基，融化后，倒入培养皿，待其冷却、完全凝固后，吸取0.1mL菌悬液涂布到培养基上，置35℃环境下厌氧培养72h，其中H₂：CO₂：N₂=5：10：85，观察菌落生长情况；

待平板出现典型菌落后，挑选出相应的菌落，进行下一步的菌株纯化；

④菌株的纯化

挑取选中的单菌落，将菌落培养物划线接种到MRS琼脂培养基上，35℃有氧环境培养72h；然后，再将培养皿上长出的单菌落，继续划线接种到MRS琼脂培养基上，35℃有氧环境培养72h；连续培养三次；

最后，将挑取的单菌落，进行革兰氏染色，显微镜下观察为革兰氏阳性、短杆、无芽孢的纯化菌株，即为获得的纯培养物，然后，将纯培养物置于无菌的20%甘油中在-70℃保存，同时接种MRS琼脂培养基试管斜面用于临时保存。

3.根据权利要求2所述的干酪乳杆菌N1115的分离纯化方法，其特征在于步骤②中所述LC培养基由以下成分组成：

蛋白胨：10g，          　　　酵母膏：1g，            　　　牛肉膏：4g，  

K₂HPO₄：2g，            　　乙酸钠：3g，           　　　 柠檬酸铵：1g，   

MgSO₄·7H₂O：0.2g，      MnSO₄·7H₂O：0.05g，     干酪素酸性水解物：1g，   

吐温-80：1g，           　　　蒸馏水：1000mL；     

该培养基调节pH6.0±0.1。

4.根据权利要求2所述的干酪乳杆菌N1115的分离纯化方法，其特征在于步骤③中所述MRS培养基由以下成分组成：

酪蛋白胨：10g，     　　   牛肉膏：10g，          酵母膏：5g，

葡萄糖：20g，         　　　 乙酸钠：5g，           柠檬酸二胺：2g，

吐温-80：1g，         　　　 K₂HPO₄：2g，          MgSO₄·7H₂O：0.2g，

MnSO₄·7H₂O：0.05g，    琼脂：15g，           　 蒸馏水：1000mL；

该培养基调节pH6.8±0.1。

5.权利要求1—4中任一项所述的干酪乳杆菌N1115具有免疫调节作用，其特征在于：该干酪乳杆菌具有诱导巨噬细胞产生IL-12、IL-6，TNF-α的能力。

6.权利要求5所述的干酪乳杆菌N1115免疫调节作用的应用，其特征在于：该干酪乳杆菌应用于制备功能性饮品和保健制剂。