[发明专利]制备乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯的方法。 

背景技术

(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG) 是从中国绿茶中提取的一种主要成份，它是绿茶主要的活性和水溶性成份，是儿茶素中含量最高的组分，占绿茶毛重的9%-13%，因为具有特殊的立体化学结构，EGCG具有非常强的抗氧化活性，在抗癌和心血管疾病方面担当了重要的角色。此外，它也用作肿瘤多药耐药性的逆转剂，能够改善癌细胞对化疗的敏感性并减轻对心脏的毒性。 

(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCG)是绿茶中最有效的抗氧化多酚， 具有抗氧化、抗癌、抗突变等活性。抗氧化活性至少是维生素C的100多倍，是维生素E的25倍，能够保护细胞和DNA受损害，这种损害相信与癌症、心脏疾病和其他重大疾病有关，EGCG的这些功效归结于他们对氧自由基的清除(抗氧化 )能力。 

但是在(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯的使用当中大家也注意到由于EGCG优良的抗氧化特性，EGCG比较容易在加工及储存当中受到热及氧气的影响被氧化而变质；另外由于EGCG良好的水溶性使得EGCG吸收后很难在体内具有良好的分布，在体内的不稳定性也大大降低了EGCG的生物利用度。 

当EGCG 的8个羟基被乙酰化(Pro-EGCG，也有称为EGCG-P)时，其稳定性远高于(-)-EGCG，并且在细胞中的吸收和积累提高了2.4倍以上。Pro-EGCG在进入细胞中后会在细胞中脂酶的作用下转变为(-)-EGCG，在细胞中的(-)-EGCG 的数量可增加2.8～30倍。用Pro-EGCG喂饲大鼠与喂饲(-)-EGCG 相比，在血液、小肠和结肠组织中相比，有较高的生物可利用性。pro-EGCG还表现有比EGCG明显较高的生物活性，如对大鼠乳腺癌和雄激素非依赖性前列腺癌的肿瘤生长有明显的抑制作用。KR Landis．Piwowar等用人体MDA-MB-231乳腺癌细胞进行实验证明，50 gmol／L 的pro-EGCG和f-EGCG处理后(每24h一次，连续3次)72h后，pro-EGCG处理中，乳腺癌细胞的增殖被抑制55％，而EGCG 处理仅16％，效果相差3.5倍。肿瘤的生长速度明显减弱，如用小鼠进行的活体实验，用50mg/kg pro-EGCG和(-)-EGCG处理，3 l d后对照处理小鼠的肿瘤大小为1582 4-29 gL，(-)-EGCG 处理小鼠为1223±21 L，而pro-EGCG 处理小鼠的肿瘤大小为723±50LLL，这说明EGCG经结构修饰后对乳腺癌细胞的生长抑制了54％。由于蛋白酶的胰凝乳蛋白酶类活性被抑制常与诱致癌细胞的凋亡有联系，因此常同时测定蛋白酶的胰凝乳蛋白酶类活性的抑制效应。研究表明，在用50gmol／L的pro-EGCG处理24h后，胰凝乳蛋白酶类活性抑制48％，而同剂量的(-)-EGCG的抑制效果仅为8％。每毫克蛋白中回收到的(-)-EGCG量为：pro-EGCG处理为530pmol，而(-)-EGCG处理为222 pmol，表明pro-EGCG（Mw：818.4g/mol）可以较多的被细胞吸收，并被转化为EGCG。用KYSE150人体食道癌细胞进行的实验也获得类似的结果。 

发明内容

本发明的目的是提供一种采用乙酰化试剂和酯化催化剂，对EGCG进行乙酰化，合成制备乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯的方法。 

本发明的目的是这样实现的：一种制备乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，以溶解后的EGCG为原料，加入乙酰化试剂和酯化催化剂，在0-120℃下搅拌下对EGCG进行乙酰化反应，经过1－24小时的反应，体系由黄色浑浊液逐渐变为透明的淡褐色液体时，乙酰化反应结束，再过提纯过程，得到乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯。 

所述的提纯过程是乙酰化反应完成的物料中加入饱和碳酸氢钠，分离出乙酸乙酯层， 再用乙酸乙酯对水相萃取, 干燥乙酯层, 旋转蒸发除去乙酯, 得透明油状物,采用无水乙醇重结晶一次，浅黄色结晶，即乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯。 

所述的乙酰化试剂为乙酸酐、乙酸或乙酰氯。 

所述的酯化催化剂为锌盐。 

所述的锌盐为ZnCl₂, Zn(Ac)₂或ZnSO。 

所述的酯化催化剂为路易斯酸催化剂。