[发明专利]大豆转录活性蛋白GmPHD5及其编码基因与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种大豆转录活性蛋白GmPHD5及其编码基因与应用。

背景技术

环境中物理、化学因素的变化，例如干旱、盐碱、低温等胁迫因素对植物的生长发育具有重要影响，严重时会造成农作物大规模减产，因此培育耐逆性高的作物是种植业的主要目标之一。目前，应用基因工程技术进行育种已经成为提高作物耐逆性的重要方法之一。高等植物细胞具有多条途径应答环境中的各种逆境胁迫，其中转录因子起着调控耐逆相关效应基因表达的作用。现已在植物中发现了多类与植物耐逆性相关的转录因子，例如：EREBP/AP2中的DREB类，bZIP，MYB等等。PHD(Plant Homodomain)类具有转录活性的蛋白广泛存在于动植物以及细菌、病毒蛋白中，比如哺乳动物的CBP类蛋白、人的ING1家族、酵母Yng2p蛋白、病毒MIR1蛋白。PHD类蛋白结构域是C4HC3类的锌指结构，其功能主要为以下几类：(1)作为乙酰化或去乙酰化酶参与染色质相关的转录调控；(2)作为E3泛素连接酶参与蛋白降解；(3)作为PIPs受体感知PIPs信号参与染色质相关的转录调控。在拟南芥中首次发现了PHD类蛋白，植物中该类蛋白的功能研究尚少。

大豆是我国五大作物之一，弄清其耐非生物胁迫分子机理，进而为提高其耐逆性提供基础，具有重要的理论及现实意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种大豆转录活性蛋白GmPHD5及其编码基因与应用。

本发明所提供蛋白，名称为GmPHD5，来源于大豆属大豆(Glycine max(L.))，是如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物耐逆性相关的由序列2衍生的蛋白质。

其中，序列表中的序列2由252个氨基酸残基组成。

上述蛋白中，一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加是指不多于十个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

上述蛋白GmPHD5的编码基因GmPHD5也属于本发明的保护范围。

该基因可为如下(1)或(2)或(3)的DNA分子：

(1)序列表中序列1所示的DNA分子；

(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码植物耐逆性相关蛋白的DNA分子；

(3)与(1)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码植物耐逆性相关蛋白的DNA分子。

所述严格条件可为如下：50℃，在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5M NaPO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，2×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M NaPO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，1×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M NaPO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.5×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M NaPO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M NaPO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在65℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；也可为：在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

其中，序列表中的序列1由759个脱氧核苷酸组成，本序列为GmPHD5基因的读码框，编码具有序列表中序列2的氨基酸残基序列的蛋白质。

含有本发明基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌均属于本发明的保护范围。

上述重组载体具体为将蛋白GmPHD5的编码基因插入pBIN438载体的BamHI和KpnI识别位点间得到的重组载体；

本发明还保护了扩增上述蛋白GmPHD5的编码基因全长或其任意片段的引物对。

上述引物对可为扩增GmPHD5的所有引物对，具体可为如下(I)或(II)：