[发明专利]一种适合悬钩子属植物核型分析的染色体制备方法

权利要求书

1.一种适合悬钩子属植物核型分析的染色体制备方法，其特征在于，其具体步骤为：

1)材料培养

通过茎扦插繁殖获取不定根，取3-5个节位的嫩梢或硬枝，扦插于塑料大棚以蛭石为基质的插床中，进行常规管理，待不定根长至1-2cm时，取健壮插穗的正在生长的根尖；

2)预处理

用0.002mol L^-1 8-羟基喹啉0-4℃下预处理24h；

3)固定

将步骤2)处理的根尖置于卡诺氏固定液I(无水乙醇∶乙酸＝3∶1，v/v，)在0-4℃下固定24h；

4)保存

将步骤的材料置于70％的乙醇中，冰箱中冷臧备用；

5)解离

取出步骤4)固定好的根尖，流水冲洗约3min，吸水纸吸干，放入小试管中，加3-5ml的1mol L^-1的HCl于60±0.5℃水浴解离60-90s，然后将HCl溶液用胶头吸管吸出，终止解离，用重蒸馏水洗涤3次，保存在重蒸馏水中备用；

6)染色、涂片和压片

取根尖置于载玻片上，用刀片切除根冠，再切分生区置于载片上，用镊子或解剖针将将材料分割成若干小块，并用解剖针轻轻涂匀；然后加1/2-1滴改良苯酚品红染液于材料上，再用解剖针轻轻涂抹，使小块尽可能分散在染液中，盖上盖玻片；

将正在处理的载玻片一边斜靠在在火柴头上，从上一侧在盖玻片处再滴一滴改良苯酚品红染液，点燃一盏酒精灯，烘烤处理的材料，烘烤1-2min，将载玻片大小的滤纸条折叠，用一手2个指头压住覆有滤纸条盖玻片的两个角，以免盖片移动，另一只手用解剖针头或有橡皮的的铅笔头对准材料轻轻敲击盖玻片，使材料均匀分散为一薄层为止，在显微镜上镜检观察，看材料是否分散以及是否有分裂相，最后用大拇指紧压盖有盖玻片的装片处；

7)镜检和观察

镜检观察，用奥林巴斯BX-51型显微镜观察，若染色体效果不尽理想，重复步骤6)，直至获得理想的染色体标本为止，然后DP70摄像头拍照、CCD分析软件进行照片处理。

2.根据权利要求1所述的适合悬钩子属植物核型分析的染色体制备方法，其特征在于，所述步骤1)中在扦插后2-4周取材。

3.根据权利要求1所述的适合悬钩子属植物核型分析的染色体制备方法，其特征在于，步骤7)中所述不尽理想情况为个别染色体不分散，或核型特征不清晰。