[发明专利]用于消化道瘘封堵的自体生物蛋白胶试剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.用于消化道瘘封堵的自体生物蛋白胶试剂，其特征在于包含如下组分：FG组分I——纤维蛋白原，1mg/ml的氨甲环酸溶液，FG组分II——凝血酶；所述的纤维蛋白原和凝血酶均由高浓度血小板血浆制备，其中所述的1mg/ml的氨甲环酸溶液与纤维蛋白原的体积比为1∶4～7。

2.根据权利要求1所述的用于消化道瘘封堵的自体生物蛋白胶试剂，其特征在于所述的高浓度血小板血浆通过如下方法制备：向全血中加入14g/100ml柠檬酸磷酸葡萄糖腺嘌呤抗凝液，23～28℃，1000g离心6-8min，分离出最上层的血浆，血浆在相同离心条件下重复离心一次，分离出最上层的血浆即为高浓度血小板血浆。

3.根据权利要求2所述的用于消化道瘘封堵的自体生物蛋白胶试剂，其特征在于所述的纤维蛋白原由所述的高浓度血小板血浆通过冷沉淀法制备得到，具体方法是：所述的高浓度血小板血浆在-80℃条件下冷冻1-6h，然后在4℃下解冻30min或至血浆全部融化，再4000rpm/min离心5min，吸出上清液，保留底部沉淀物，即得到浓缩的纤维蛋白原；所述的凝血酶通过如下方法制备：将所述的高浓度血小板血浆加入2.84mM柠檬酸中稀释，4℃下3000g离心5min，弃去上清液，沉淀中加入CaCl₂，加入NaHCO₃调节PH值至中性，待凝血块完全形成，吸出液态的凝血酶；其中所述的高浓度血小板血浆与柠檬酸溶液的体积比为1∶8～9.5；加入的CaCl₂与高浓度血小板血浆的质量比为0.0005～0.001∶1。

4.根据权利要求1所述的用于消化道瘘封堵的自体生物蛋白胶试剂，其特征在于1mg/ml的氨甲环酸溶液与纤维蛋白原的体积比为1∶5。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的用于消化道瘘封堵的自体生物蛋白胶试剂，其特征在于所述的FG组分I除纤维蛋白原，1mg/ml的氨甲环酸溶液外，还包含浓度为1×10⁶个/ml的人脂肪干细胞。

6.根据权利要求1～4中任一项所述的用于消化道瘘封堵的自体生物蛋白胶试剂，其特征在于所述的FG组分I除纤维蛋白原，1mg/ml的氨甲环酸溶液外，还包含15nm的纳米银溶液。

7.权利要求1所述的用于消化道瘘封堵的自体生物蛋白胶试剂的制备方法，其特征在于包含如下步骤：

(1)制备高浓度血小板血浆：向全血中加入14g/100ml柠檬酸磷酸葡萄糖腺嘌呤抗凝液，23～28℃，1000g离心6-8min，分离出最上层的血浆，血浆在相同离心条件下重复离心一次，分离出最上层的血浆即为高浓度血小板血浆；

(2)制备纤维蛋白原：将步骤(1)制备的高浓度血小板血浆在-80℃条件下冷冻1-6h，然后在4℃下解冻30min或至血浆全部融化，再4000rpm/min离心5min，吸出上清液，保留底部沉淀物，即得到浓缩的纤维蛋白原；

(3)制备凝血酶：将步骤(1)制备的高浓度血小板血浆加入2.84mM柠檬酸中稀释，4℃下3000g离心5min，弃去上清液，沉淀中加入CaCl₂，加入NaHCO₃调节PH值至中性，待凝血块完全形成，吸出液态的凝血酶；其中所述的高浓度血小板血浆与柠檬酸溶液的体积比为1∶8～9.5；加入的CaCl₂与高浓度血小板血浆的质量比为0.0005～0.001∶1；

(4)试剂组装：将所述的纤维蛋白原，凝血酶，以及1mg/ml的氨甲环酸溶液分别分装于不同容器中，-20℃保存；其中1mg/ml的氨甲环酸溶液与所述的纤维蛋白原的体积比为1∶4～7，优选1∶5。

8.根据权利要求7所述的用于消化道瘘封堵的自体生物蛋白胶试剂的制备方法，其特征在于所述的步骤(4)试剂组装：将所述的纤维蛋白原，凝血酶，以及1mg/ml的氨甲环酸溶液，以及浓度为1×10⁶/ml的人脂肪干细胞分别分装于不同容器中，-20℃保存；其中1mg/ml的氨甲环酸溶液与所述的纤维蛋白原的体积比为1∶4～7，优选1∶5；或者

步骤(4)试剂组装：将所述的纤维蛋白原，凝血酶，，1mg/ml的氨甲环酸溶液以及15nm的纳米银溶液分别分装于不同容器中，-20℃保存；其中1mg/ml的氨甲环酸溶液与所述的纤维蛋白原的体积比为1∶4～7，优选1∶5。

9.权利要求1～6中任一项所述的用于消化道瘘封堵的自体生物蛋白胶试剂在制备治疗全消化道瘘的药物或医疗器械中的应用。