[发明专利]含有可诱导型癌基因的细胞系及其建立方法、应用

权利要求书

1.一种含有可诱导型癌基因的细胞系，其特征在于，所述的细胞系的保藏号为CCTCC NO：C201192，所述的细胞系中K-ras^G12V蛋白的表达可被强力霉素所调控，所述的细胞系为TRex-K-ras^G12V-293细胞系。

2.根据权利要求1所述的细胞系，其特征在于，所述的细胞系中稳定转入了pcDNA6/TR质粒和含有K-ras^G12V癌基因的pcDNA4/TO-K-ras^G12V质粒。

3.根据权利要求1所述的细胞系，其特征在于，所述的pcDNA4/TO-K-ras^G12V质粒上12位密码子含有K-ras^G12V突变的基因序列。

4.一种细胞系的建立方法，其特征在于，所述的细胞系为TRex-K-ras细胞系，所述的建立方法包括：

(1)突变的K-ras^G12VcDNA全编码序列经PCR扩增后插入pcDNA4/TO载体，产生pcDNA4/TO-K-ras^G12V；

(2)经DNA测序证实pcDNA4/TO-K-ras质粒在12位密码子发生了点突变；

(3)将pcDNA4/TO-K-ras^G12V质粒转入含pcDNA6/TR质粒的TRex-293细胞；

(4)用稻瘟菌素和博来霉素筛选出转入TRex-K-ras^G12V质粒的稳定细胞克隆，并增殖扩展为TRex-K-ras^G12V-293细胞系，其保藏号为CCTCC NO：C201192。

5.一种如权利要求1所述的含有可诱导型癌基因的细胞系作为高通量药物筛选平台模型的用途。

6.一种以细胞为基础的高通量药物筛选平台，其特征在于，所述的细胞为TRex-K-ras^G12V-293细胞。

7.一种以如权利要求1所述的TRex-K-ras^G12V-293细胞系为细胞模型的高通量药物筛选平台硬件系统的组成方案，其特征在于，所述的组成方案至少包含一台96通道高通量自动移液工作站和一台全自动酶标仪。

8.一对作为高通量药物筛选平台板间对照的对照板，其特征在于，所述的对照板分别使用Tet/on的TRex-K-ras^G12V-293细胞和Tet/off TRex-K-ras^G12V-293的细胞。

9.根据权利要求8所要求的对照板，其特征在于，所述的一对对照板分别同时接受八种常用标准抗癌药物的处理，所述的一对对照板内各自包含空白对照、标准对照和溶剂对照等三种对照。

10.一种以细胞为基础的高通量药物筛选数据的分析方法，其特征在于，所述的细胞为TRex-K-ras^G12V-293细胞，所述的分析方法包括如下步骤：

(1)酶标仪测得各孔吸光值后，应用相应的软件首先自动扣除背景值；

(2)将所得各吸光值与DMSO对照组进行比较，得到某个化合物对on/off状态下TRex-K-ras^G12V-293细胞的活性分数；

(3)将某种化合物作用于Tet/off细胞所得活性分数与其作用于Tet/on细胞所得活性分数相除，即得到该种化合物的选择性指数；选择性指数越高，说明该种化合物对K-ras^G12V突变的细胞的选择性杀伤作用越强。