[发明专利]制备转TGEV-S基因玉米的方法

权利要求书

1.一种在植物中表达TGEV S蛋白的方法，包括如下步骤：将TGEV S蛋白的编码基因导入出发植物，得到表达所述TGEV S蛋白的转基因植物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述出发植物为玉米。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述编码基因为如下1)或2)或3)或4)所示：

1)其核苷酸序列是SEQ ID NO：2中自5′末端第1-2208位核苷酸所示DNA分子；

2)其核苷酸序列是SEQ ID NO：2所示DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子；

4)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上的同源性且编码所述蛋白的DNA分子。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述编码基因是通过权利要求5所述的重组表达载体导入的。

5.一种重组表达载体，按照如下方法制备：

用SacI和EcoRI双酶切载体pBI221，回收农杆菌胭脂碱合成酶基因NOS3′末端终止子片段，再将其插入载体pSP72的SacI和EcoRI位点间，得到重组载体，计作pBPC18；

将E35S启动子插入pBPC18的HindIII和XbaI位点，得到中间重组载体1；将Hsp70 intron1用BglII和BamHI酶切后插入所述中间重组载体1的BamHI位点，得到重组载体，计作pBAC154；

将所述TGEV S蛋白的编码基因插入载体pBAC154的BamHI和SacI位点，得到重组载体，计作pBAC175；

用HindIII和BamHI酶切质粒pBARGUS，回收含有CaMV 35S启动子和玉米Adh1内含子的目的片段，再将其插入到pSP72的HindIII和BamHI位点，得到中间重组载体2；将编码抗除草剂草甘膦的玉米EPSP基因插入中间重组载体2的BamHI和EcoRI位点，获得重组载体，计作pSHK49；

将pSHK49用EcoRI酶切后补成平端，引入含HindIII位点的适配子序列，计作pSHK49H3；

用HindIII酶切pSHK49H3，回收含有CaMV 35S启动子和玉米Adh1内含子和EPSP基因的片段，将其插入到pBAC175的HindIIII位点，得到目的重组表达载体。

6.一种预防猪传染性胃肠炎的产品，其活性成分为权利要求1-4中任一所述方法制备得到的转基因植物的组织或器官。

7.根据权利要求6所述的产品，其特征在于：所述组织或器官为叶片。

8.权利要求1-4中任一所述方法制备得到的转基因植物的组织或器官在制备预防猪传染性胃肠炎的产品中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述组织或器官为叶片。