[发明专利]一种检测猪流产嗜性衣原体抗体的ELISA试剂盒

权利要求书

1.一种检测猪流产嗜性衣原体抗体的ELISA试剂盒，其特征在于该试剂盒包括有：抗原包被的酶标板、阳性对照血清、阴性对照血清、羊抗猪酶标二抗、样品稀释液、洗涤液、封闭液、底物缓冲液A、底物缓冲液B和终止液，其中抗原包被的酶标板上包被有重组衣原体主要外膜蛋白rMOMP。

2.按权利要求1所述的检测猪流产嗜性衣原体抗体的ELISA试剂盒，其特征在于所述的重组衣原体主要外膜蛋白rMOMP的包被浓度为0.97μg/mL。

3.按权利要求1或2所述的检测猪流产嗜性衣原体抗体的ELISA试剂盒，其特征在于所述的阳性对照血清和阴性对照血清使用时与样品稀释液的稀释比均为1:50，所述的羊抗猪酶标二抗使用时与样品稀释液的稀释比为1:5000。

4.按权利要求3所述的检测猪流产嗜性衣原体抗体的ELISA试剂盒，其特征在于所述的重组衣原体主要外膜蛋白rMOMP的制备方法是：

1）以临床分离的猪源衣原体为病原株，提取病原株的总DNA为模板，经特异性引物进行PCR扩增得到主要外膜蛋白MOMP全基因片段，对其核苷酸序列进行测定并分析预测其信号肽位点及抗原表位分布，依据上述分析测定结果，利用主要外膜蛋白MOMP全序列上天然存在的BamHⅠ位点，选取主要外膜蛋白MOMP上无信号肽、抗原性强、而且抗原表位均位于其表面的部分片段；

2）将主要外膜蛋白MOMP截取部分的片段与pET-28a连接并转入大肠杆菌DH_5α感受态细胞中，提取质粒，经PCR及酶切鉴定，测序，筛选出正确连接的阳性克隆，获得重组质粒pET-28a-MOMP；将此重组质粒pET-28a-MOMP转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中，经诱导表达、镍离子亲和层析纯化得到得到重组猪流产嗜性衣原体主要外膜蛋白rMOMP。

5.按权利要求4所述的检测猪流产嗜性衣原体抗体的ELISA试剂盒，其特征在于所述的特异性引物为：

上游P1：ttaggatccATGAAAAAACTCTTGAAATCG；

下游P2：gcggtcgacTTAGAATCTGAATTGAGC。