[发明专利]一种检测猪流产嗜性衣原体抗体的ELISA试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及动物传染病检测领域，具体的是涉及一种检测猪流产嗜性衣原体抗体的ELISA试剂盒。 

技术背景

衣原体是一类专性细胞内寄生的，大小介于细菌和病毒之间的革兰氏阴性微生物，能在鸡胚和易感脊椎动物的细胞内生长繁殖，具有独特的双阶段发育周期。衣原体感染在世界范围内广为流行，是一种能够引物人和动物患病的人畜共患病原体。依据衣原体核糖体rRNA的序列比对以及多形态限制性酶切位点的分析，将衣原体科分为衣原体属和嗜性衣原体属。衣原体属包含沙眼衣原体、猪衣原体和鼠衣原体；嗜性衣原体属包含鹦鹉热嗜性衣原体、流产嗜性衣原体、肺炎嗜性衣原体、家畜嗜性衣原体、猫嗜性衣原体以及豚鼠嗜性衣原体。 

衣原体具有广泛的宿主，家畜中羊、牛、猪以及各种家禽均可感染发病。猪感染衣原体后，临床症状主要表现为妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎、产弱仔等；各年龄段猪表现为肺炎、肠炎、多发性关节炎、心包炎以及结膜炎等；公猪感染后主要发生睾丸炎、附睾炎以及尿道炎等。 

1955年，美国人winigan等首先发现衣原体对猪具有致病性，他们从患心包炎病猪病料分离出了衣原体。罗马尼亚学者Sorodok等1959年和1965年分别报道了猪群感染衣原体，发生肺炎，大批母猪流产及新生仔猪死亡的病例。此后，英国、前苏联、德国和日本也陆续报道表现不同症状的猪衣原体病。我国从80年代开始关注和研究猪衣原体病。杨宜生等在国内首先报道猪衣原体病，他们从流产母猪和多发性关节炎仔猪的病料中分别分离出衣原体。90年代后，猪衣原体感染呈上升趋势，我国各省均有衣原体感染猪导致流产、死胎等的报道，而且衣原体血清学调查报告显示各省规模化猪场中衣原体血清学检测结果阳性率普遍较高。邱昌庆等(2000)对河北省衡水地区某规模化猪场的猪衣原体病进行检测,阳性率达35%。高双娣等(2003)报道甘肃省猪衣原体病的流行情况,对甘肃省7个市(地)的部分猪场猪群用间接血凝试验进行衣原体血清抗体检测，共检测468份猪血清,总阳性率达34.4%,个别地区的阳性率高达67%。白挨泉等(2004)对广东部分地区猪衣原体病的血清学做了调查,10个猪场的阳性率为14.3%-94.1%。王海志(2004)对辽宁铁岭市6个规模较大的养猪场的猪衣原体病进行了调查,平均阳性率达5.16%。索绪峰等(2005)对海南省部分市县13个猪场的972份血清用间接血凝试验进行猪衣原体病抗体检测,结果显示猪场整体抗体阳性率为49.5%,其中母猪群抗体阳性率为53.66%。陆文俊（2006）对广西部分地市猪场衣原体病调查，结果显示平均阳性率为20.77%。近些年来，各省家畜疫病普查表明，猪衣原体病在我国大部分地区都有流行，而且阳性感染率呈现增高趋势。分析原因主要是对衣原体对养猪业的危害认识不够，防控意识不强。同时，随着规模化养猪场的快速发展，针对衣原体病的诊断没有很好的方法可以应用。 

众多研究者对牛的衣原体病和禽类的衣原体病关注较多，而对猪的衣原体病研究较少。传统的猪衣原体病检测方法主要有细胞培养法、血凝实验以及酶联免疫吸附试验等，而这些实验方法都不同程度的存在缺陷。细胞培养法操作繁琐、周期长等；血凝实验的敏感度低；而已有的酶联免疫吸附实验中所用包被抗原均为全病原，这对具有种间特异性的衣原体诊断并不适合，而且存在容易造成病原扩散的潜在危险性。现在普遍应用的PCR检测技术对实验条件要求较高，目前尚难以普及。因此，开发一种简便、高效、廉价的猪衣原体抗体检测试剂盒无论对于科学研究亦或是临床检测猪衣原体病的流行状况等都有重要的意义。 

衣原体的外膜蛋白主要包括40kDa的主要外膜蛋白（MOMP）、富含半胱氨酸的60kDa的大蛋白和12kDa的小蛋白等组成。40kDa的衣原体主要外膜蛋白(MOMP)占衣原体外膜蛋白的60%以上，具有血清型、亚种、种和属特异性抗原决定簇，大量实验研究表明该蛋白是衣原体的主要保护性抗原。在牛的衣原体病及禽类的衣原体病检测方面或者是亚单位疫苗的研制中，MOMP均作为目的抗原而被大量研究。但是衣原体的MOMP蛋白具有种属特异性，这些实验方法在检测猪的衣原体病方面存在局限性。迄今为止，尚未有推广应用的用于检测猪衣原体病的方法报道。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术而提供一种快速、准确检测猪流产嗜性衣原体抗体的ELISA试剂盒，可供科学研究使用以及临床对猪衣原体病的监测及诊断等临床应用。