[发明专利]一种测定毛喉鞘蕊花中半日花烷型二萜的方法

说明书

技术领域

本发明属天然药物质量分析领域，涉及一种测定毛喉鞘蕊花中半日花烷型二萜的方法，具体涉及一种采用基质固相分散技术检测毛喉鞘蕊花中半日花烷型二萜的方法。

背景技术

毛喉鞘蕊花Coleus forskohlii(Willd)Briq.系唇形科Labiatae鞘蕊花属Coleus Lour.植物，具有强心、降压、抗血栓、平喘等作用，长期用于治疗心血管疾病、感冒、咳嗽和呼吸紊乱等疾病。现有技术公开了毛喉鞘蕊花中的主要有效成分为半日花烷型二萜(又称劳丹烷型二萜)，包括异佛司可林(isoforskolin)、佛司可林(forskolin)等，上述成分通常作为毛喉鞘蕊花药材的质量评价指标。通常国外品种以佛司可林为指标，而国内品种中的主要有效成分为异佛司可林，故以其为定量指标；近年来也见有同时测定异佛司可林等多种半日花烷型二萜的研究报道。

目前，检测毛喉鞘蕊花药材中异佛司可林等半日花烷型二萜的方法主要采用高效液相色谱法(HPLC)，在常规分析中采用紫外(UV)、二极管阵列检测检测器(DAD)或蒸发光散射检测器(ELSD)；特殊需要时，如要求专属、灵敏地检测时，则联用贵重的质谱检测器(MS)。为了制得供液相分析的供试品溶液，常需要对样品进行前处理。

一般毛喉鞘蕊花以全草入药，其中含有叶绿素等多种极性与非极性杂质，待测成分半日花烷型二萜没有紫外特征吸收峰，在常规分析中采用200～210nm的紫外末端吸收或通用性的ELSD进行检测，上述检测方法的专属性不强，样品中各种各样的其他组分会被检出，从而对二萜的测定产生严重干扰。当采用专属的质谱检测器测定时，也要求样品洁净，否则将对质谱系统造成污染或产生基质效应，因此，要准确测定毛喉鞘蕊花药材中的异佛司可林等二萜类成分，样品前处理是至关重要的步骤。

有文献报道指出，为了有效地提取二萜类成分并去除干扰物，样品前处理过程一般需包括提取和净化两步，其中，提取方法包括索氏提取、超声提取、微波辅助萃取等，得到的提取物还需要进一步净化才能供液相色谱分析；净化方法包括液液萃取法、硅胶柱层析和氧化铝柱层析等。因此，上述的样品前处理的方法存在以下缺点：步骤复杂、耗时、有机溶剂的消耗量较大，液液萃取易引起乳化现象等。

基质固相分散(MSPD)是一种提取净化的新技术，其优点在于：集样品分散、提取和净化为一体，从而可简化操作过程，缩短样品制备时间；以及减少或避免样品多次浓缩和转溶造成的待测物损失，消除液液萃取产生的乳化现象。目前已有将MSPD技术用于天然药物中化学成分定量分析的报道，但该方面的研究有限，尚未见涉及针对毛喉鞘蕊花中二萜类成分的测定的报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种测定毛喉鞘蕊花中半日花烷型二萜的方法，尤其涉及一种采用基质固相分散技术检测毛喉鞘蕊花中半日花烷型二萜的方法；该方法解决目前液相色谱分析前样品前处理过程复杂、费时的问题。

本发明采用基质固相分散技术萃取毛喉鞘蕊花中的二萜类成分，并去除极性与非极性干扰物，然后采用高效液相色谱法定性、定量分析异佛司可林等5种半日花烷型二萜，本方法明显简化了样品前处理的复杂过程，节省了时间，降低了有机溶剂的消耗，消除了液液萃取引起的乳化现象，且准确、灵敏。

具体而言，本发明的测定毛喉鞘蕊花中半日花烷型二萜的方法，其特征在于，采用基质固相分散-液相色谱法测定毛喉鞘蕊花中的二萜，其包括步骤：

(1)药材药品的前处理

毛喉鞘蕊花药材粉末与倍量的固体载体于研钵中研磨，将获得的混合样品装入固相萃取小柱，先以5～10％甲醇为淋洗剂通过小柱，抽干，加入少量洗脱剂浸润，超声后或直接以洗脱剂通过小柱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇或含水甲醇复溶解，制得供试品溶液；

(2)液相色谱法测定上述供试品溶液中的半日花烷型二萜

采用高效液相色谱法(HPLC)，定性、定量分析半日花烷型二萜，其中，所述色谱分析的固定相为十八烷基键合硅胶，流动相为乙腈-水或甲醇-水；

本发明中，与液相联用的检测器可选自紫外、二极管阵列检测器、蒸发光散射检测器或质谱检测器；

本发明中，定性、定量分析的半日花烷型二萜包括异佛司可林、佛司可林、佛司可林G、佛司可林J和佛司可林A。

本发明的方法中，所述的毛喉鞘蕊花药材粉末与固体载体的质量比为0.1～1∶3～5；

所述的固体载体为烷基键合硅胶，本发明的一个实施例中优选C₁₈键合硅胶；

所述的洗脱剂选自甲醇、甲醇-乙酸乙酯或甲醇-二氯甲烷。