[发明专利]一组卷烟赋香菌株及复配的微生物制剂及其应用

权利要求书

1.一种卷烟赋香菌株，其特征在于，该卷烟赋香菌株命名为芽孢杆菌(Bacillus sp.)LBT1.0007，保藏号为CGMCC No.5332。

2.一种卷烟赋香菌株，其特征在于，该卷烟赋香菌株命名为芽孢杆菌(Bacillus sp.)LBT1.0013保藏号为CGMCC No.5333。

3.一种卷烟赋香菌株，其特征在于，该卷烟赋香菌株命名为酵母菌(Saccharomyces sp.)LBT1.0038，保藏号为CGMCC No.5334。

4.一种卷烟赋香微生物复配制剂，其特征在于，该卷烟赋香微生物复配制剂含有芽孢杆菌(Bacillus sp.)LBT1.0007、芽孢杆菌(Bacillus sp.)LBT1.0013和酵母菌(Saccharomyces sp.)LBT1.0038，且芽孢杆菌(Bacillus sp.)LBT1.0007∶芽孢杆菌(Bacillus sp.)LBT1.0013∶酵母菌(Saccharomyces sp.)LBT1.0038＝(0.001～1)∶(0.001～1.5)∶(0.005～15)。

5.权利要求1或2所述的卷烟赋香菌株的分离筛选方法，其特征在于，该方法，先用无菌生理盐水与1g醇化烟叶混合后，用无菌取样的方法取1mL混合液加入到9mL灭菌生理盐水中制成10^-1菌悬液，然后逐级稀释，取10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7六个稀释度的菌悬液0.2mL涂布到LB培养基上，37℃恒温培养24h，挑取长势良好，菌落饱满均匀，且稀释度适宜的平板的单菌落，镜检；

LB培养基主要成分为：胰化蛋白胨：1％，酵母提取物：0.5％，NaCl：1％；

镜检若为纯培养单一菌株，则接种于LB斜面固体培养基，37℃恒温培养24h后保藏于4℃冰箱；

LB斜面固体培养基主要成分为：胰化蛋白胨：1％，酵母提取物：0.5％，NaCl：1％；琼脂：2％；

镜检若为混合菌株，则再次在LB培养基平板上进行划线分离，直至镜检为菌株纯培养物后，接种斜面试管，37℃恒温培养24h后保藏于4℃冰箱；

对筛选所得的所有纯培养菌株用于烟叶发酵，并根据烟叶理化性质和评吸结果，最终筛选和确定卷烟赋香菌株。

6.权利要求3所述的卷烟赋香菌株的分离筛选方法，其特征在于，该方法，先用无菌生理盐水与1g醇化烟叶混合后，用无菌取样的方法取1mL混合液加入到9mL灭菌生理盐水中制成10^-1菌悬液，然后逐级稀释，取10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7六个稀释度的菌悬液0.2mL涂布到YPD培养基上，32℃恒温培养24h，挑取长势良好，菌落饱满均匀，且稀释度适宜的平板的单菌落，镜检；

YPD培养基主要成分为：酵母膏：1％，蛋白胨：2％，葡萄糖：2％；

镜检若为纯培养单一菌株，则接种于YPD斜面固体培养基，37℃恒温培养24h后保藏于4℃冰箱；

YPD斜面固体培养基主要成分为：酵母膏：1％，蛋白胨：2％，葡萄糖：2％；琼脂：2％；

镜检若为混合菌株，则再次在YPD培养基平板上进行划线分离，直至镜检为菌株纯培养物后，接种斜面试管，37℃恒温培养24h后保藏于4℃冰箱；

对筛选所得的所有纯培养菌株用于烟叶发酵，并根据烟叶理化性质和评吸结果，最终筛选和确定卷烟赋香菌株。