[发明专利]一组卷烟赋香菌株及复配的微生物制剂及其应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及3种卷烟赋香菌株及复配的卷烟赋香微生物制剂，其中包括2株芽孢杆菌(Bacillus sp.)和1株酵母菌(Saccharomyces sp.)，该卷烟赋香微生物制剂能够用于卷烟发酵，替代传统的加香，经发酵处理的卷烟理化指标和评吸结果均达到商品化卷烟标准。 

背景技术

卷烟工业中，根据不同卷烟叶组中的烟叶品种、烟叶产地、烟叶等级、烟叶年份和烟叶配比等，通过加料加香，赋予卷烟产品特定产品风格，提供给消费者特定的感官体验。通过加料，可以改善卷烟的吸食品质、改善烟丝的物理性状、改善烟丝的燃烧性和防止烟丝霉变等；通过加香，在不损害烟叶原有香气的情况下，衬托烟香，同时掩盖杂气，达到增香赋香、改善吃味和协调香味的作用，进而最终形成卷烟产品风格。按照来源不同，烟草香料包括天然香料和合成香料2大类。然而，世界卫生组织(WHO)在《烟草控制框架公约》中建议各国限制或禁止在烟草中使用香料等添加剂，包括葡萄糖、蜂蜜、香草醛和中草药等天然或合成烟香香料都在范围内。我国已于2005年正式批准《烟草控制框架公约》，减少和限制天然和合成香料的使用是大势所趋。 

采用烟叶表面微生物来达到替代传统加料加香的目的，以期形成新的卷烟的卷烟产品。本领域技术人员也做了大量的工作，实际上，微生物发酵已被证明可改善烟叶可用性，是烟叶吸食品质形成的重要环节，根据发酵方式的不同，可分为人工发酵和自然发酵，国内外学者针对烟叶的人工发酵进行了大量的研究和实践。然而，但还未有仅使用复配微生物制剂用于卷烟产品风格形成的报道。 

发明内容

针对卷烟工业发展的需求，本发明目的在于，通过分离、筛选、培养得到了3株卷烟赋香菌株，经复配可以用于卷烟叶组的赋香，替代传统加料加香工艺。经实验证明，采用该复配菌株制剂用于卷烟发酵后，卷烟的理化指标和评吸结果均达到商品化卷烟标准。 

为了实现上述任务，本发明的方法通过以下技术方案得以实现： 

一种卷烟赋香菌株，其特征在于，该卷烟赋香菌株命名为芽孢杆菌(Bacillus sp.)LBT1.0007，保藏号为CGMCC No.5332。 

一种卷烟赋香菌株，其特征在于，该卷烟赋香菌株命名为芽孢杆菌(Bacillus sp.)LBT1.0013，保藏号为CGMCC No.5333。 

一种卷烟赋香菌株，其特征在于，该卷烟赋香菌株命名为酵母菌(Saccharomyces sp.)LBT1.0038，保藏号为CGMCC No.5334。 

一种卷烟赋香微生物复配制剂，其特征在于，该卷烟赋香微生物复配制剂含有芽孢杆菌(Bacillus sp.)LBT1.0007、芽孢杆菌(Bacillus sp.)LBT1.0013和酵母菌(Saccharomyces sp.)LBT1.0038，且芽孢杆菌(Bacillus sp.)LBT1.0007∶芽孢杆菌(Bacillus sp.)LBT1.0013∶酵母菌(Saccharomyces sp.)LBT1.0038＝(0.001～1)∶(0.001～1.5)∶(0.005～15)。 

上述芽孢杆菌(Bacillus sp.)LBT1.0007或芽孢杆菌(Bacillus sp.)LBT1.0013的分离筛选方法，其特征在于，该方法先用无菌生理盐水与1g醇化烟叶混合后，用无菌取样的方法取1mL混合液加入到9mL灭菌生理盐水中制成10^-1菌悬液，然后逐级稀释，取10^-2、10^-3、10^-4、10 ^-5、10^-6、10^-7六个稀释度的菌悬液0.2mL涂布到LB培养基上，37℃恒温培养24h，挑取长势良好，菌落饱满均匀，且稀释度适宜的平板的单菌落，镜检； 

LB培养基主要成分为：胰化蛋白胨：1％，酵母提取物：0.5％，NaCl：1％；酵母提取物(yeast extract)，也称酵母膏，市售。 

镜检若为纯培养单一菌株，则接种于LB斜面固体培养基，37℃恒温培养24h后保藏于4℃冰箱； 

LB斜面固体培养基主要成分为：胰化蛋白胨：1％，酵母提取物：0.5％，NaCl：1％；琼脂：2％； 

镜检若为混合菌株，则再次在LB培养基平板上进行划线分离，直至镜检为菌株纯培养物后，接种斜面试管，37℃恒温培养24h后保藏于4℃冰箱；