[发明专利]松花粉超临界萃取物中总黄酮含量的测定方法

权利要求书

1.一种松花粉超临界萃取物中总黄酮含量的测定方法，其特征是它包括如下步骤：

步骤1. 标准储备液的制备：精密称取芦丁对照品适量，加甲醇溶解并定容至100 ml，配成150 μg?ml^-1的芦丁标准储备液；

步骤2. 供试样品溶液的制备：

精密称取松花粉超临界萃取物2.0 g，用滤纸包紧置于平底烧瓶中，加入100 ml 70%乙醇溶液，浸润后在80℃水浴下回流2 h，粗提液冷却后减压抽滤，用少量25%乙醇洗涤烧瓶和滤渣，合并滤液，减压蒸馏除去其中的乙醇，倒出烧瓶内溶液，抽滤，并用30 ml热水分3次洗涤烧瓶，抽滤后，将滤液倒入分液漏斗中，以75 ml三氯甲烷分3次萃取脱脂，收集水溶液，旋转蒸发至干后加70%乙醇溶解后用于下述的柱层析加样；

取经预处理的聚酰胺树脂粉末湿法装柱，用水饱和，吸取上述脱脂后的样品沿层析柱慢慢滴入柱内，放置一定时间，至待测液被充分吸附后，用70%乙醇洗脱，收集洗脱液，上述洗脱液浓缩定容得供试样品溶液，用于测定总黄酮的含量；

步骤3. 测定方法：精密量取上述供试样品溶液或芦丁标准溶液适量于10 ml量瓶中，加30%乙醇液至5 ml，加质量百分浓度为5%亚硝酸钠溶液0.3 ml，振摇后放置5 min，加入质量百分浓度为10%硝酸铝溶液0.3 ml摇匀后放置6 min，加1.0 mol?L^-1氢氧化钠溶液2 ml，用30%乙醇定容至刻度，摇匀，以相应的试剂为空白，在510 nm处测定吸光度；

    步骤4. 结果计算：以芦丁标准溶液的测定数据制作标准曲线，以供试样品溶液的测定数据对照标准曲线计算出样品溶液中总黄酮的量。