[发明专利]一种花粉管介导的玉米原位转基因方法无效
| 申请号： | 201110374885.8 | 申请日： | 2011-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN102392044A | 公开（公告）日： | 2012-03-28 |
| 发明（设计）人： | 刘德璞 | 申请（专利权）人： | 刘德璞 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00 |
| 代理公司： | 长春众益专利商标事务所(普通合伙) 22211 | 代理人： | 赵正 |
| 地址： | 130033 吉林省长*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 花粉管 玉米 原位 转基因 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种花粉管介导的玉米原位转基因方法，其特征是采用如下步骤完成：
(1)种植受体玉米，按正常管理至开花期；
(2)菌种准备，平板菌种贮藏于4℃冰箱，每周活化一次，一个月后用YEP液体培养基于21℃培养三天至对数期，OD600＝1，离心取出菌体，重悬至侵染培养基，调节密度在OD600＝0.7-1，23-25℃摇床培养4-5小时，制成感染液，用来侵染；
(3)转化操作，在20-25℃天气温度操作，用剪刀将距离雌穗顶端1cm的花丝剪平，将感染液注入包叶内，滴入量2-4ml，套上纸袋，经过1.5小时后人工授粉；，
(4)收获及筛选转化子。待玉米成熟后收获，筛选时，将种子用筛选剂溶液处理，然后播于蛭石介质的盘中筛选，或待出苗后涂抹叶片，选出抗性苗，经分子检测获得阳性株后，移栽至大花盆或直接进入田间。
2.根据权利要求1所述的花粉管介导的玉米原位转基因方法，其特征于：授粉时，将花丝分开，然后授粉，随即套袋再次隔离，管理至结实成熟。
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