[发明专利]一种微量、复杂DNA的扩增方法

权利要求书

1.一种微量、复杂DNA扩增方法，其特征在于， 加入含有海藻糖的全基因组扩增反应试剂、和DNA聚合酶，27~42℃保温反应。

2.根据权利要求1所述的微量、复杂DNA扩增方法，其特征在于，步骤包括：步骤1，将DNA变性，然后加入到缓冲液中；

步骤2，向所述缓冲液中加入海藻糖，混合后，在冰上放置；

步骤3，然后加入含有海藻糖的扩增反应试剂、和DNA聚合酶，27~42℃保温反应；

步骤4，加热终止反应。

3.根据权利要求2所述的微量、复杂DNA扩增方法，其特征在于，步骤1中所述基因组DNA变性方法为：

预纯化提取基因组DNA样品进行变性；或

完整细胞加入变性型裂解液进行裂解从而实现基因组DNA的释放变性。

4.根据权利要求3所述的微量、复杂DNA扩增方法，其特征在于，所述DNA样品为：完整基因组DNA、经过不同DNA内切酶或修饰酶处理的基因组DNA、或经过DNA连接酶处理的单链或双链cDNA、或其他反转录而产生的DNA、或人工合成的DNA。

5.根据权利要求1或2所述的微量、复杂DNA扩增方法，其特征在于，海藻糖在反应体系中的终浓度为0.1~1.0M。

6.根据权利要求1或2所述的微量、复杂DNA扩增方法，其特征在于，所述扩增反应试剂包括：

1）10~50mmol/L Tris-HCl(pH值为7.5)、5~50mmol/L NaCl、2~20mmol/L MgCl₂、2~50mmol/L (NH₄)₂SO₄、1~10mmol/L DTT组成的10倍稀释缓冲液；

2）dNTPs，每种0.1~0.5mM；

3）1~20 pmol/μl浓度的9碱基随机引物；

4）10~200ng/μl浓度的BSA；

5）海藻糖0.1~1.0M；

此时NDA聚合酶为0.5~50ng/μl。

7.根据权利要求6所述的微量、复杂DNA扩增方法，其特征在于，扩增引物为不同长度6至15碱基的寡核苷酸引物且3’端以硫代磷酸化修饰或其他可对抗核酸外切酶降解的修饰；同时引物为随机或部分随机，引物组成为脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸。

8.根据权利要求1或2所述的微量、复杂DNA扩增方法，其特征在于，所述DNA聚合酶为phi 29 DNA聚合酶其改造而来的衍生DNA聚合酶或替代酶。

9.根据权利要求8所述的微量、复杂DNA扩增方法，其特征在于，所述替代酶为：Bst DNA 聚合酶、或T7 天然DNA 聚合酶、或测序酶、或Vent DNA 聚合酶，这些酶可以单独使用或结合使用，或结合其他酶使用。