[发明专利]一种包括酵母细胞中表达的HPV16型L1和E7靶抗原的嵌合蛋白疫苗及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明属于生物医学技术领域，特别是生物疫苗技术领域，涉及利用HPV16L1、HPV16E7的嵌合型蛋白为靶抗原，适当比例配伍，制备HPV疫苗，用于预防HPV引起的部分疾病。 

背景技术：

子宫颈癌是妇女常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于乳腺癌，位居女性恶性肿瘤第二。据世界范围内统计，每年约有50万宫颈癌新发病例，每天有600名妇女死于宫颈癌，其中80％在发展中国家。我国每年约新发病例13.15万，占世界新发病例的1/3。大量研究资料表明高危险人乳头瘤状病毒(HPV)感染是引发宫颈癌的重要原因之一。HPV是一种嗜黏膜和皮肤上皮DNA病毒，20世纪70年代发现宫颈癌的发生与HPV有关，20世纪80年代宫颈癌活组织检查发现HPV16。HPV感染大多数由低危型的如HPV-6和HPV-11感染，造成良性生殖器疣；而高危型HPV与肛门及生殖器区域的癌前病变及恶性病变有关。对多数患者来说，生殖道HPV存留可达年，直到出现另一新型别的HPV感染才自然消退研究显示，HPV16和HPV18会存留更长时间周期持续HPV感染是宫颈上皮。近年来宫颈癌发病出现年轻化趋势，这主要与HPV感染增多有关。因此，研发安全、有效、经济的宫颈癌疫苗迫在眉睫，具有重大的经济学价值和社会意义。研究证明90％左右的宫颈癌的组织可以检测到HPV16亚型，HPV16型与鳞癌有着密切关系，而90％的宫颈癌为鳞癌，所以HPV16是女性宫颈癌发病的主要原因。巴斯德毕赤酵母表达系统是现目前广泛应用的异源蛋白真核表达系统，其具有稳定性好、表达高效、分泌量大、规模化容易和成本低廉等优点，且具有糖基化等翻译后修饰功能。 

HPV晚期基因编码的主要结构蛋白L1及次要蛋白L2构成了病毒衣壳，二者比例约5∶1。单独的L1蛋白可以自发组装成直径与HPV成熟病毒大小相近(约55nm)的VLPs，VLPs和天然HPV病毒的形态相似，都是二十面体结构，只是VLP内部无病毒核酸。L1、L2蛋白既是病毒的主要抗原成分，也是与细胞受体结合的位点所在。E7蛋白是HPV16的一种重要的肿瘤排斥抗原，E7蛋白的表位主要集中于第1～60个氨基酸之间。病毒样颗粒(VLPs)是不含核酸的空壳蛋白，形态上天然的病毒颗粒相似，具有很强的免疫原性和生物学活性。人类乳头状瘤病毒(HPV)16型早期蛋白E7被证实不仅对细胞恶性转化和维持恶性过程起着关键作用，而且还是肿瘤排斥抗原。因此，阻止肿瘤形成的E7疫苗已成为近年研究热点。 

疫苗防治HPV相关疾病是近几年来的研究热点。由于目前无法通过组织培养获得大量的HPV病毒，并且考虑到HPVE6、E7基因的潜在致癌性，因此，不能通过减毒活疫苗或灭活 疫苗等传统疫苗制备方式获得HPV疫苗。伴随分子生物学和基因工程技术的发展，目前HPV疫苗研究主要集中在VLPS疫苗、重组病毒疫苗、亚单位疫苗等。VLPS疫苗主要是以HPV衣壳蛋白L1为首选目的蛋白，HPVLI蛋白分别在原核表达系统、酵母表达系统和杆状病毒表达系统中得以表达，且可自组装成VLPS，其动物实验及部分临床实验结果表明L1蛋白装配成的VLPs具有良好的免疫原性。 

全世界流行病学总体调查研究结果表明，HPV引起恶性肿瘤的型别在世界各地不尽相同。其中HPV16是最主要的致癌因素，其他型别在世界各地与肿瘤发生的相关性不同。HPV16和HPV18型在各大洲的流行型别占65～75％左右，为HPV感染的主要型别，也是目前两种HPV疫苗组份型别，其他型别表现的差异较大。 

发明内容：

要解决的技术问题