[发明专利]检测结肠腺癌相关基因启动子甲基化引物

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物技术领域，尤其涉及一系列检测结肠腺癌相关基因启动子甲基化引物。

背景技术

肿瘤相关特异基因的启动子CpG区域的甲基化修饰与肿瘤发生和形成相关。值得关注的是，不同类型的肿瘤以及同一肿瘤的不同病理分型和分级，会发生特异的基因甲基化修饰，因此，肿瘤相关基因的甲基化状态已经成为一类重要的肿瘤检测标志物，可用于肿瘤早期检测、肿瘤预后评价和药物敏感性预测和评价。

共轭聚合物为基础的荧光共振能量转移技术(Cationic conjugated polymer-basedfluorescence resonance energy transfer，CCP-FRET)能提高检测的敏感性和特异性，将这个技术应用于甲基化半定量分析，具有高效、成本低廉、操作简单、无需标记技术和特殊设备优点。而传统的DNA测序方法操作繁琐，敏感性较低；Real time PCR尽管具有较高的敏感性，但是它的成本较高，此外，对检测仪器的需求也限制了其在临床的实际应用。因此，CCP-FRET方法有希望成为临床常规检测方法。

发明内容

本发明的一个目的是提供检测待测DNA甲基化的引物。

本发明提供的引物，为如下1)或2)：

1)所示的引物由引物对A-引物对F组成；

所述引物对A由引物1和引物2组成；

所述引物对B由引物3和引物4组成；

所述引物对C由引物5和引物6组成；

所述引物对D由引物7和引物8组成；

所述引物对E由引物9和引物10组成；

所述引物对F由引物11和引物12组成；

所述引物1-引物12的核苷酸序列依次分别为序列表中的序列1-12；

2)所示的引物为所述引物对A-引物对F中的至少一种。

上述引物对A用于检测VIM基因的甲基化；所述引物对A具体用于检测VIM基因CpG位点的甲基化；

上述引物对B用于检测MGMT基因的甲基化；所述引物对B具体用于检测MGMT基因CpG位点的甲基化；

上述引物对C用于检测TMEFF2或HPP1基因的甲基化；所述引物对C具体用于检测TMEFF2或HPP1基因CpG位点的甲基化；

上述引物对D用于检测ESR1基因的甲基化；所述引物对D具体用于检测ESR1基因CpG位点的甲基化；

上述引物对E用于检测APC基因的甲基化；所述引物对E具体用于检测APC基因CpG位点的甲基化；

上述引物对F用于检测MLH1基因的甲基化；所述引物对F具体用于检测MLH1基因CpG位点的甲基化。

上述的CpG位点为CCGG；上述各引物均独立包装。

本发明的另一个目的是提供一种检测待测DNA的甲基化的PCR试剂。

本发明提供的PCR试剂，为如下1)或2)：

1)所示的PCR试剂包括PCR试剂A1-PCR试剂F1；

所述PCR试剂A1由所述引物对A、dNTPs、PCR扩增缓冲液和DNA聚合酶组成；

所述PCR试剂B1由所述引物对B、dNTPs、PCR扩增缓冲液和DNA聚合酶组成；

所述PCR试剂C1由所述引物对C、dNTPs、PCR扩增缓冲液和DNA聚合酶组成；

所述PCR试剂D1由所述引物对D、dNTPs、PCR扩增缓冲液和DNA聚合酶组成；

所述PCR试剂E1由所述引物对E、dNTPs、PCR扩增缓冲液和DNA聚合酶组成；

所述PCR试剂F1由所述引物对F、dNTPs、PCR扩增缓冲液和DNA聚合酶组成；

2)所示的PCR试剂包括PCR试剂A1-F1中的至少一种。

1)所示的PCR试剂还包括PCR试剂A2-PCR试剂F2；

2)所示的PCR试剂还包括PCR试剂A2-PCR试剂F2中的至少一种；

所述PCR试剂A2-PCR试剂F2为将所述PCR试剂A1-PCR试剂F1中的dNTPs替换为dNTPs’；

所述dNTPs’由荧光素标记的dATP、荧光素标记的dGTP、dATP、dCTP和dTTP组成。

1)所示的PCR试剂由PCR试剂A1-F1和PCR试剂A2-F2组成；

2)所示的PCR试剂由PCR试剂A1-F1中至少一种和与其对应的PCR试剂A2-F2中至少一种组成；

所述荧光素为购于中国同位素公司。