[发明专利]一种大菱鲆耐高温个体的筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鱼类的养殖方法，具体涉及一种大菱鲆耐高温个体的筛选方法。

 

背景技术

大菱鲆(Scophthalmus maximus)原产于北纬30°～68°的欧洲大西洋东北部沿海，适应低水温，因其具有的多种优良特性，20世纪七八十年代被欧洲各国开发为重要的海水养殖对象，我国随后引种养殖，目前年产值超过80亿元人民币。大菱鲆能够在3℃的低水温下生活，7℃以上可正常生长，10℃以上可快速生长，但对夏季高温的耐受能力较差，在国内，每年的7月～9月是高温病害频发季节。受到自然海区水温的限制，我国养殖大菱鲆多采用“深井海水+温室大棚”模式，虽然成效卓著，但缺点也很明显：不仅抽水耗能大，而且给环境造成很大破坏，部分养殖区因深水井分布密度过大、过度抽取而造成地下水位大幅度下降，甚至枯竭。为使大菱鲆养殖节省抽水能耗，在春、秋季使用自然海水进行养殖，减少地下水的使用量，部分自然海水资源丰富而缺乏地下海水的地区甚至可以开展非深井海水的养殖模式，因而非常有必要选育大菱鲆的耐高温品系。

目前海洋生物耐高温品系/群体选择的研究进行的较少，尚未形成成熟有效的技术方案。现有的方法，主要有高温胁迫下生化指标比对法和高温培育死亡淘汰法。

高温胁迫下生化指标比对法：在对生物进行高温胁迫培育后，测定总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化物酶(POD)的活性变化,及抗坏血酸(维生素C)、维生素E、可溶性蛋白和丙二醛(MDA)的含量等生化指标的变化，比对不同品系和个体之间的参数，从而选定耐高温品系/群体。此方法测定生化指标费时、费力，且测试中需要大量仪器、试剂耗材，花费高昂，并且无法进行较大规模的筛选，不利于大批量筛选耐高温个体。但是该方法在对生物进行高温胁迫培育后，测定总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化物酶(POD)的活性变化,及抗坏血酸(维生素C)、维生素E、可溶性蛋白和丙二醛(MDA)的含量等生化指标的变化，比对不同品系和个体之间的参数，从而选定耐高温品系/群体。此方法测定生化指标费时、费力，且测试中需要大量仪器、试剂耗材，花费高昂，并且无法进行较大规模的筛选，不利于大批量筛选耐高温个体。

高温培育死亡淘汰法：在生物的不同发育时期使用高温养殖淘汰法进行，高温水养殖一定时间后，能够存活的个体即被认为是耐高温能力较强的个体。此方法需要使用较大规格的鱼苗，并且需要使用高温海水在一个较长的时间内进行，花销大，试验周期长，获得的耐高温鱼个体少，因此只能在小型的试验中使用，无法进行大规模的筛选。但该方法在生物的不同发育时期使用高温养殖淘汰法进行，高温水养殖一定时间后，能够存活的个体即被认为是耐高温能力较强的个体。此方法需要使用较大规格的鱼苗，并且需要使用高温海水在一个较长的时间内进行，花销大，试验周期长，获得的耐高温鱼个体少，因此只能在小型的试验中使用，无法进行大规模的筛选。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种成本低、操作便捷、快速获得耐高温个体、快速获得较大数量的一种大菱鲆耐高温个体的筛选方法。

本发明的目的是通过以下技术手段实现的：一种大菱鲆耐高温个体的筛选方法，通过在大菱鲆胚胎发育至出现心跳之后的三个发育时期：器官形成期、尾芽期、出膜前期，使用不同温度的高温海水进行不同时间长度的高温胁迫，通过死亡淘汰法选择耐高温的大菱鲆个体，而不同热激温度-热激时长的组合，可以获得不同比率的正常初孵仔鱼。

一种大菱鲆耐高温个体的筛选方法，其具体步骤为：

（1）镜检胚胎：在大菱鲆受精卵孵化设施中取样，使用显微镜/解剖镜观察发育情况，判别胚胎发育时期；

（2）确定选择压力及需要筛选的耐高温个体占全部胚胎数量的百分比，通过表1、2、3查询所适用不同的热激温度-热激时长组合；

表1、热激温度-热激时长组合处理后孵化仔鱼正常率对照表——器官形成期

表2、热激温度-热激时长组合处理后孵化仔鱼正常率对照表——尾芽期

表3、热激温度-热激时长组合处理后孵化仔鱼正常率对照表——出膜前期

（3）预热水浴锅或其它温控设备，使其加热海水，使海水温度达到设计热激温度；

（4）准备热激网具、计时器等用品；