[发明专利]一种检测动物肌肉组织中替米考星的前处理试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全分析技术领域，更具体涉及一种检测动物肌肉组织中替米考星(tilmicisin，TLM)的前处理试剂盒，同时还涉及一种动物肌肉组织中替米考星残留量检测的方法，本试剂盒及检测方法适用于鲜活动物(鱼、虾、猪、鸡)肌肉组织中替米考星残留量检测的样品前处理及检测。

背景技术

替米考星(Tilmicosin)是80年代由英国Elanco动物保健品公司研发成功的，主要用于牛、奶牛、山羊、绵羊、猪、鸡、鱼等动物由敏感菌引起的感染性疾病。替米考星是一种半合成的大环内酯类抗生素，是泰乐菌素(Tylosin)的衍生物，具有同泰乐菌素相似的抗菌谱，对革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌、霉形体、螺旋体等均有抑制作用。其主要通过抑制细菌的蛋白合成起到杀菌的作用。在畜禽上的研究表明，其对胸膜肺炎放线杆菌、溶血性巴氏杆菌、多杀性巴氏杆菌及畜禽霉形体具有比泰乐菌素更强的活性。随着人们对大环内酯类药物研究的深入，替米考星等大环内酯类药物对人类的危害也逐渐被人们所认识，如大环内酯可产生交叉耐药性，高残留会对人类造成至敏性和毒性反应，尤其是敏感个体等。欧盟和我国均对动物性食品中替米考星残留量有严格的限止。为了保障我国人民的健康和避免由于动物性食品中替米考星残留而引起的贸易壁垒，加强对动物性食品中替米考星残留的检测是非常必要的。

目前，检测动物肌肉组织中替米考星的前处理方法，提取过程复杂，消耗有机溶剂量大，净化过程多采用固相萃取小柱(SPE柱)，不仅增加了工作量，而且增加了检测的成本。在对前处理好的样品进行替米考星检测所用的流动相(液相)组分复杂，且配制过程繁琐、耗时，所用添加剂对色谱柱有较大的损害。

动物肌肉组织中替米考星用传统的前处理及检测方法费时、费钱且操作过程复杂不易掌握。为提高对动物肌肉组织中替米考星残留检测的效率，节约检测成本，研制动物肌肉组织中TLM检测的前处理试剂盒及检测方法具有非常重要的经济和社会意义。目前，国内外均未见有动物肌肉组织中替米考星检测前处理试剂盒的报道。

发明内容

本发明目的是在于提供了一种检测鲜活动物肌肉组织中替米考星(tilmicisin，TLM)的样品前处理试剂盒，样品前处理所用试剂价格便宜，容易获得，且用量小，样品处理无需用固相萃取小柱进行样品净化，从而大大节约了检测成本；该试剂盒操作方便快捷，适于大量鲜活动物肌肉样品的处理，从而大大提高了样品前处理的效率；该试剂盒将所需试剂整合于一个前处理试剂盒内便于携带和储存。

本发明的另一个目的是在于提供了一种经本前处理试剂盒处理后的样品中替米考星残留量的检测方法，该检测方法流动相配制简单，用量少，且所用试剂对色谱柱无损害；该检测方法所用时间短，且在较短的时间内能将替米考星的2种同分异构体(顺式异构体和反式异构体)分离，从而大大节约了检测时间和检测成本。从使用该前处理试剂盒和检测方法的效果来看，样品处理干净，在色谱图上无杂质峰干扰且能将替米考星的2种同分异构体较好分离。该方法是一种能够快速、准确、灵敏地检测利用本前处理试剂盒处理的样品的超高效液相色谱法(UPLC)。

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施：

一种动物肌肉组织中替米考星检测的前处理试剂盒，本发明前处理试剂盒主要由盒体、试剂管A、试剂袋B、试剂管C、试剂瓶D、试剂瓶E、试剂袋F。盒体内分为a、b、c、d 4个区，a和b区为适合试剂管A和试剂管C放置的孔区，c区放试剂袋B和试剂袋F的凹槽，d区放试剂瓶D和试剂瓶E的凹槽。

优选的，所述的试剂管A中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一种液体试剂。

优选的，所述的试剂袋B中是氯化钠、碳酸钠、硝酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、硫酸钠或硫酸镁中任一种试剂。

优选的，所述试剂管C中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一种液体试剂。

优选的，所述试剂瓶D中是氯化钠、碳酸钠、硝酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、硫酸钠钾或硫酸镁中任一种试剂的溶液。

优选的，所述试剂瓶E中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一种液体试剂。

优选的，所述试剂试剂袋F中是氯化钠、碳酸钠、硝酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、硫酸钠钾或硫酸镁中任一种试剂。

试剂D的溶液的配制方法：取试剂D 2-20g，溶于200mL的蒸馏水中溶解配制成浓度为1％-10％的试剂D的溶液。