[发明专利]醚型菊酯类农药通用半抗原，抗原、合成方法及其应用

权利要求书

1.一种醚型菊酯的通用半抗原，具有如下分子结构：

2.一种醚型菊酯的人工通用抗原，其特征在于：是在具有如下结构的分子：的羧基基团上偶联载体蛋白得到的分子。

3.根据权利要求2所述的人工通用抗原，所述载体蛋白指牛血清白蛋白BSA或卵白蛋白OVA，制备得到的抗原分别为免疫原和包被原。

4.权利要求2或3所述的人工通用抗原的制备方法，包括如下制备步骤：

(1)合成通用半抗原；

(2)所述通用半抗原与载体蛋白偶联；

所述合成通用半抗原的合成路线为：

5.权利要求4所述的制备方法，所述通用半抗原的合成步骤为：

(1)称取2-(4-乙氧基苯基)-2-甲基丙醇溶于无水DMF，质量体积比0.1g/ml；

(2)于冰浴下加入氢化钠，氢化钠的量为所述2-(4-乙氧基苯基-2-甲基丙醇量的25％，室温下搅拌至无气泡产生；然后加入氯乙酸钠搅拌15min，氯乙酸钠的量为所述2-(4-乙氧基苯基)-2-甲基丙醇量的25～30％；

(3)转至60℃油浴反应6小时后，于室温搅拌反应50小时得反应液；

(4)反应液倾入到蒸馏水中，用乙醚洗涤，水相用1M盐酸酸化至pH为2后用乙醚萃取，合并有机相用蒸馏水和饱和食盐水洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，旋转蒸发得到琥珀色的油状物，即为半抗原Hapten I。

6.权利要求4或5所述的制备方法，所述通用半抗原与载体蛋白偶联的采用活化酯法制备，步骤如下：

(1)称取0.05mmol半抗原Hapten I溶于1ml N，N-二甲基甲酰胺中，边搅拌边加入15.5mg DCC和9mg NHS，室温下搅拌反应6h，于10000r/min离心10min，得上清液为A液；

(2)称取33.5mg BSA或21.5mg OVA溶于10ml 0.2M，pH9.0的硼酸盐缓冲液中，得为B液；

(3)4℃，磁力搅拌条件下，滴加A液于B液中，磁力搅拌过夜；

(4)次日，将反应液于PBS缓冲液中4℃透析，透析液于10000r/min离心5min，上清液冷冻干燥得到抗原。

7.权利要求2或3所述的人工通用抗原作为免疫原在制备用于检测醚型菊酯的抗体或抗血清中的应用。

8.权利要求2或3所述的人工通用抗原在采用间接Elisa法检测醚型菊酯中作为包被原的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，所述包被原的包被浓度为1μg/ml，间接Elisa法中抗体稀释1.5×104倍。。

10.权利要求2或3所述的人工通用抗原作为免疫原免疫动物制备得到的抗血清、抗体或杂交瘤细胞。