[发明专利]醚型菊酯类农药通用半抗原，抗原、合成方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术，特别是一种醚型菊酯类农药通用抗原、合成方法及其应用。

背景技术

拟除虫菊酯类(Pyrethroids)农药是20世纪70年代在天然除虫菊酯结构基础上发展起来的一类仿生杀虫剂，具有性质稳定、高效广谱等特点，但其残留期较长，抗性问题日趋严重，对水生生物高毒^[1-2]。醚型拟除虫菊酯是近年来研究产生的新型菊酯类杀虫剂，这类化合物具有触杀及胃毒活性，对光稳定，残效适中，对哺乳动物及鱼类低毒，是一类非常有前途的环境友好型农用杀虫剂。最具有代表性的化合物有醚菊酯、氯醚菊酯、溴氟醚菊酯、氟硅菊酯、三氟醚菊酯等在防治农业害虫、除螨和趋避白蚁方面，展现着广阔的应用前景。随着其使用量和品种的不断增加，这类农药的残留和抗性问题也引起人们的重视，探明这类农药在环境和生物体内的残留动态、代谢途径与代谢产物也是十分重要的，因而研究痕量醚型菊酯类农药的检测方法具有重要意义。

目前对醚型菊酯类农药残留的分析方法主要有气相色谱-质谱(GC-MS)、超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)、凝胶渗透色谱(GPC)等方法[8-10]。尽管这些方法灵敏度高，但样品前处理步骤较多，分析费用较高且费时，需要熟练的技术操作人员，难以实现现场快速检测及大批量样品的筛选的要求。酶联免疫吸附技术(Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA)是将抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用相结合发展建立的一种免疫分析方法((YANG Li-Guo(杨利国)，HU Shao-Chang(胡少昶)，WEI Ping-Hua(魏平华)，GUOAi-Zhen(郭爱珍).Enzyme Immunoassay Techniques(酶免疫测定技术).Nan jing(南京)：Nan Jing University press(南京大学出版社)，1998：439～442)。该方法灵敏度高、操作简便快速，不需昂贵的精密仪器设备能较好的满足对醚型菊酯类农药快速检测的需要。国外已有Shiro Miyake、Hideo Ohkawa等进行了相关研究.其中Shiro Miyake制备针对醚菊酯的两种多抗和三种多抗，Hideo Ohkawa主要对醚菊酯ELISA检测中的最优的甲醇含量与反应温度进行研究(Shiro Miyake，Akiko Hayashi.Biosci Biotechem Biochem，1998，62(5)：1001～1004；Masanao K，Tomako K，Kennichi M，Fumihide I，Hideo O.Biosci Biotechem Biochem，1999，63(11)：1988～1990)

人工抗原的合成是农药免疫检测中抗体制备和建立免疫分析方法最关键的步骤，半抗原的合成是人工抗原合成的基础。大多数农药是分子量小于1000的小分子化合物，本身不具备免疫原性，因此，必须先将农药小分子与载体蛋白子偶联制备出农药完全抗原。如果农药不能直接通过双功能交联剂与载体蛋白共价偶联，则需先通过衍生过程在农药分子上产生活性功能团，以此作为半抗原，再与载体蛋白质偶联。多数醚型菊酯类农药属于此类小分子。半抗原设计的关键是尽可能的保留原待测物质的特征结构，并在适当的位置引入合适的连接臂和与载体蛋白偶联的活性基团。不同结构的连接臂、不同的偶联方法或连接臂的引入位置，都影响后续建立的ELISA检测的灵敏度和特异性。

另外，目前针对复配使用的农药中的醚型菊酯残留检测暂未引起本领域的重视，合成高效价，特异性强的且具有醚型菊酯类共同结构特征的通用抗原，是采用酶联免疫检查复配使用的醚型菊酯残留的关键。

发明内容

本发明根据上述领域的需求和空白，提供一种醚型菊酯类农药通用抗原及其制备方法。经试验数据验证，该抗原具有较高的免疫原性，制备得到的抗血清与醚型菊酯类物质具有良好的亲和性。

一种醚型菊酯的通用半抗原，具有如下分子结构：

一种醚型菊酯的人工通用抗原，其特征在于：是在具有如下结构的分子：的羧基基团上偶联载体蛋白得到的分子。

所述载体蛋白指牛血清白蛋白BSA或卵白蛋白OVA，制备得到的抗原分别为免疫原和包被原。

上述人工通用抗原的制备方法，包括如下制备步骤：

(1)合成通用半抗原；

(2)所述通用半抗原与载体蛋白偶联；

所述合成通用半抗原的合成路线为：

所述通用半抗原的合成步骤为：