[发明专利]核桃楸皮提取物在治疗胃癌药物中的应用

权利要求书

1.核桃楸皮提取物在治疗胃癌药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的核桃楸皮提取物在治疗胃癌药物中的应用，其特征在于所述的

1)HYT的提取

取核桃楸皮2.5kg,加入石油醚约5000 m1,液料比10∶1，浸泡过夜后萃取3次,每次8h,旋转蒸发仪回收石油醚萃取层留存;余下残药用氯仿5000ml萃取3次,每次8h,旋转蒸发仪回收氯仿层;最后以乙酸乙酯5000m1萃取3次,每次8h,旋转蒸发仪回收乙酸乙酯层；

2)HYT对MFC及CES-1细胞增殖影响的检测

取对数生长期的细胞,以4×10⁴个/孔接种于96孔板中,100u1/孔,培养24h后,将MFC细胞分为7组:200、100、50、25、12.5ug/In1HYT组、阳性对照组(25ug/m15-FU)和阴性对照组(不加药物,只加培养基),GES-1细胞分为4组:200、100ug/m1HYT组、阳性对照组(25ug/ml

5-FU)和阴性对照组(不加药物,只加培养基)

每组均设3个复孔,每孔加入100u1相应药物,置37℃,5%CO₂,饱和湿度孵箱内培养24和48h后,每孔加入5mg/m1MTT20u1,继续培养4h,,吸弃培养液,每孔加入100u1DMSO,终止培养,酶标仪硐490nm处读取A值,按下式计算细胞增殖抑增殖抑制率(RI)；

RI(%)=(阴性对照组A值-用药组A值)/阴性对照组A值×100%

3)HYT对MFC细胞周期影响的检测

取对数生长期的MFC细胞,以l×10⁵个/孔接种于6孔板,每孔100ul,置37℃,5%CO₂,饱和湿度孵箱中培养24h后,分为4组:200、100ug/mlHYT组、阳性对照组(25ug/m15-FU)和阴性对照组(不加药物,只加培养基),分别在培养24和48h后收集细胞,PBS洗涤2次,75%冰乙醇4℃固定24h,染色并上流式细胞仪检测细胞周期的变化；

4)HYT对MFC细胞凋亡影响的检测

细胞培养及分组同前,采用流式细胞术,PI标记法,在流式细胞仪488nm波长处检测细胞凋亡情况。