[发明专利]一种防止拜氏梭菌菌株退化的方法

权利要求书

1.一种防止拜氏梭菌菌株退化的方法，其特征在于，按照如下步骤：

(1)构建退化菌株模型；

(2)恢复退化菌株产丁醇代谢。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)构建退化菌株模型的是指：

C.beijerinckii NCIMB8052野生菌株芽孢悬浮液150μl于75℃热激10min，然后接种至10ml TGY液体培养基，其中TGY液体培养基包括3％胰蛋白胨，2％葡萄糖，1％酵母粉，0.1％半胱氨酸，厌氧培养箱内30℃培养过夜；10％的培养物转接量进行连续转接，每6h一次，转接至10ml的新鲜TGY液体培养基中，共计转接50次，获得退化菌株，命名为DG150；保存DG150的培养物，采用25％甘油保存法，-80℃；6％的转接量转接DG150培养物至P2发酵培养基，其中P2发酵培养基60g/L葡萄糖，1g/L酵母粉，1％buffer，1％Vitamin，1％Mineral，厌氧培养箱内30℃进行发酵，每隔12h取样、共计发酵72h，使用分光光度计测定细菌的OD₆₀₀，同时样品离心取上清进行丁醇、丙酮、乙醇、乙酸、丁酸的GC分析。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)恢复退化菌株产丁醇代谢是指：

2g/L CaCO₃，(NH₄)₂CO₃，NH₄HCO₃，K₂CO₃，NaHCO₃，Na₂CO₃加入至P2发酵培养基，6％转接量转接DG150培养物至P2培养基，连续培养72h，每隔12小时取样，细菌OD₆₀₀的测定、样品前处理和分析方法同步骤(1)；

恢复退化菌株产丁醇代谢的添加物CaCO₃的使用浓度确定：

对CaCO₃的使用浓度进行了实验，分别有0g/L CaCO₃、2g/LCaCO₃、4g/L CaCO₃、6g/L CaCO₃、8g/L CaCO₃、10g/L CaCO₃，发酵P2培养基、细菌OD₆₀₀的测定、取样方法、丁醇、丙酮、乙醇、乙酸、丁酸的分析方法同步骤(1)。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中1％buffer包括50g/L KH₂PO₄、50g/L K₂HPO₄、220g/L乙酸铵，1％Vitamin包括0.1g/L对氨基苯甲酸、0.1g/L硫胺素、0.001g/L生物素；1％Mineral包括20g/L MgSO₄·7H₂O、1g/L MnSO₄·H₂O、1g/L FeSO₄·7H₂O、1g/L NaCl。