[发明专利]水相凝胶渗透色谱法检测交联透明质酸体外酶解的方法有效
| 申请号： | 201110392623.4 | 申请日： | 2011-12-01 |
| 公开（公告）号： | CN102495154A | 公开（公告）日： | 2012-06-13 |
| 发明（设计）人： | 简军;李睿智 | 申请（专利权）人： | 北京爱美客生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02 |
| 代理公司： | 天津市杰盈专利代理有限公司 12207 | 代理人： | 王小静 |
| 地址： | 102200 北京市昌平区科技*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 凝胶 渗透 色谱 检测 交联 透明 体外 方法 | ||
1.一种水相凝胶渗透色谱法检测交联透明质酸体外酸酶的方法，其特征在于它包括如下步骤：
1)取1mL微小颗粒状的交联透明质酸产品于比色管中，加入300单位的透明质酸酶，用水稀释至2mL，于37℃恒温水浴振荡器中，从稀释后开始计时，从第二十分钟开始，每二十分钟用微量注射器取50μL上清液，取出的上清液置于冰箱迅速冷却至5℃；
2)取3-5小时之内的酶解上清液，分别用水相凝胶渗透色谱(GPC)检测不同时段的上清液分子量，当分子量趋于常数时，则可确定该产品酶解完成。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的水相凝胶渗透色谱(GPC)检测的具体色谱条件与试剂：
色谱条件：
色谱柱：Waters Part No.WA To11545 7.8×300mm Ultrahydrogel 250
流动相：去离子水；
泵：Waters 1515 Isocratic HPLC Pump；
检测器：Waters 2414 Refractive Index Detector；
柱流量：1.0mL/min；
柱温：35℃；
进样口温度：180℃；
检测器温度：300℃；
进样量：50～100μL；
内部加热：37℃；
柱压：1000psi，不高于2500psi；
pH范围：2～12；
有机相＜20％；盐浓度＜800mM；
分子量范围：1000＜Mn＜6×106；
柱体积：6～12mL；
流动相改变值：＜0.3mL/min。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的交联透明质酸是用1，2，7，8-二环氧辛烷作为透明质酸的交联剂合成。
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