[发明专利]高敏感的内切核酸酶的生产方法、内切核酸酶的新制品及其用途

权利要求书

1.一种重组体BFN1内切核酸酶制品，其中所述重组体BFN1具有以下错配优选特性：G/G～G/A～A/G～G/T～T/G＞T/T～A/A～C/C～T/C＞C/T～A/C～C/A，并且能够在59倍过量野生型等位基因存在下识别突变体等位基因。

2.一种如权利要求1所述重组体内切核酸酶制品的用途，用于检测在DNA双链体内由碱基替代引起的错配，或者在所述双链体中的一个链内插入或缺失一个或多个核苷酸引起的错配。

3.一种如权利要求1所述的重组体内切核酸酶制品在基因组中靶向诱导的局部损害(Targeting-Induced Local Lesions IN Genomes，TILLING)错配剪切方案中的用途。

4.一种如权利要求1所述重组体内切核酸酶制品的用途，用于通过Ecotilling鉴别自然群体中DNA的多态性。

5.一种如权利要求1所述重组体内切核酸酶制品作为错配检测试剂的用途。

6.一种如权利要求1所述重组体内切核酸酶制品在错配筛选方法中的用途。

7.一种如权利要求1所述重组体内切核酸酶制品的用途，用于在任何有机体种群或由此衍生的细胞系中的靶基因中同时筛选一个或多个突变，其通过下列步骤进行：

a)对所述种群中每一个体的所述靶基因或其部分进行扩增，

b)将所述扩增产品在2维或3维矩阵中进行排序，包括行、列(2维矩阵)和柱(3维矩阵)，

c)将所述扩增产品集中，以此获得不同的库，每一个库代表所述矩阵的一列、一行或一柱，

d)向每一个库添加从非突变基因获得的参照扩增产品，并在允许形成异源双链的环境下对这些库进行培养，以及

e)用所述内切核酸酶制品对每一个库进行培养，以及

f)在所述培养的库中检测异源双链的存在。

8.一种如权利要求1所述重组体内切核酸酶制品的用途，用于在任何有机体种群中或由其衍生的细胞系中对一个靶基因中的一个或多个突变同时进行筛选，其中进行以下步骤：

a)在包括行、列(2维矩阵)和柱(3维矩阵)的2维或3维矩阵中对所述种群的每一个体进行排序，

b)将每一列、行和柱集中以此获得不同的库，从而使每一个库代表所述矩阵的一列、一行或一柱，

c)向每一个库中添加从非突变基因获得的参照基因产品，

d)在每一个库内对所述靶基因或其部分进行扩增，以此获得扩增产品的库，

e)在允许形成异源双链的环境下对所述扩增产品的库进行培养，

f)用所述内切核酸酶制品对所述扩增产品的库进行培养，以及

g)在所述培养的库中检测异源双链的存在。