[发明专利]hSCARB2基因转殖鼠的制造及其做为肠病毒感染动物模式的应用

说明书

技术领域

本发明是关于肠病毒感染动物模式的制备，更特别地是关于SCARB2基因转殖鼠的制造，以及其做为手足口病的动物模式上的应用。

背景技术

肠病毒71型(EV71)已被证实会引起手足口病(HFMD)、疱疹性咽峡炎，和神经系统的病变如无菌性脑膜炎、脑炎及类小儿麻痹症候群，甚至在婴幼儿造成致死疾病，并且在全世界爆发严重的疫情(AbuBakar et al.，1999，Virus Res 61(1)，1-9；Chang，Huang，and Lin，1998，Lancet 352(9125)，367-8；Bible et al.，2007，Rev Med Virol 17(6)，371-9)。及至今日，透过公共卫生对肠病毒71型疫情的控制与医疗照护仍显不足。目前并没有疫苗可供临床适用。因此，研究肠病毒71型感染的机制，以供开发有效的治疗药物或预防性疫苗实属重要。

现已知有多种动物模式被发展，欲应用于研究EV71感染的致病原因(参见，例如Chen et al.，2004，J Gen Virol 85(Pt 1)，69-77；Nagata et al.，2004，J Gen Virol85(Pt 10)，2981-9；Ong et al.，2008，J Neuropathol Exp Neurol 67(6)，532-42；Weng et al.，2010，Infect 12(7)，505-10)。而目前使用的肠病毒动物模式，是利用新生一天大的ICR小鼠，以EV71感染进行人为发展而得，新生的ICR小鼠在EV71感染后会出现后肢麻痹，并且最后在受感染2周内死亡(Wu et al.，2001，Vaccine20(5-6)，895-904)。然而，由于该ICR小鼠仅适用于，评估小鼠对于肠病毒感染或疫苗引起的免疫反应，无法真正模拟在人类受到感染后所引发的免疫反应。同时，由于该小鼠模式并未呈现肠病毒感染后的HFMD症状，故利用其所进行的研究观察只局限于，肠病毒感染后小鼠的存活率及神经性毒性，无法确实应用在评估药物或疫苗，对于肠病毒感染的治疗及/或预防功效。此外，目前使用的ICR小鼠因为免疫系统发育不全，可能无法充分反应肠病毒EV71的毒性，及了解其对于神经系统的影响。

再者，目前使用的ICR小鼠是利用小鼠适应过的肠病毒株(mouse-adaptedEV71 strain，参见Wang et al.，2004，J Virol 78(15)，7916-24)进行感染试验，但由于该病毒并没有存在于自然界，故无法使受感染的ICR小鼠表现出真正的，天然流行肠病毒株感染后应有的HFMD症状及神经性毒性(Perez-Velez et al.，2007，Clin Infect Dis 45(8)，950-7)。且经研究发现，以自然界流行的肠病毒株感染已知的成年ICR、Balb/c、CH3、C57BL/6等实验用小鼠(这些皆不表现EV71接受体)后，都完全不会引起HFMD症状及神经性毒性(Wang，2004，如前述；Chen et al.，2004，J Gen Virol 85(Pt 1)，69-77)。

近来研究发现，人类清道夫接受体B类，膜蛋白质2型(human scavenger receptor class B，member 2；hSCARB2)是肠病毒71型及克沙其病毒16型(Coxsackie A16)进入细胞的接受器(Yamayoshi et al.Nat Med 15(7)：798-801，2009)，虽然小鼠SCARB2与人类SCARB2(hSCARB2)具有85.8％同源性，但显示其不作为EV71的受体。本发明遂建立hSCARB2基因转殖鼠作为肠病毒实验动物感染模式，以期仿真肠病毒的感染途径，研究其引起手足口病和神经系统病变的致病机转，并藉以评估肠病毒疫苗在此动物模式中的免疫保护效力，以及候选治疗性药物或疫苗对于肠病毒感染的防治功效，以增进对肠病毒感染致病机制的了解，以及应用于有效肠病毒疫苗的研发。

发明内容

本发明是基于发现，人类清道夫接受体B类，膜蛋白质2型(以下简称SCARB2)为肠病毒进入细胞的接受器，遂建立SCARB2基因转殖鼠作为肠病毒71型实验动物感染模式，应用于研究EV71引起的神经系统病变机转，及分析EV71疫苗的保护作用，以开发有效的治疗药物或是预防肠病毒感染相关疾病的疫苗。