[发明专利]降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶细菌的制备方法

权利要求书

1.一种降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶细菌的制备方法，其特征是：采用选择性培养基筛选并纯化能够降解滤纸的细菌，其步骤如下：

    （1）野外取搀杂有大量腐烂至棕黄色或黑色木屑的土壤，置干净塑料袋中，在自然条件下风干7天；

   （2）利用铺有滤纸的ST21CX培养基筛选降解滤纸的细菌，配制放线菌酮液；在100mL经高压灭菌的ST21CX基础液中加放线菌酮液1mL，倒在平板上；取无菌滤纸铺于培养基上，将风干的土样无菌研磨至研钵内，研磨成细粉状，取适量使之均匀撒在铺有滤纸的ST21CX培养基上，28℃-30℃培养2～3周； 

  （3）挑取能够明显降解滤纸的菌落在VY/2培养基上28℃-30℃培养,然后再次挑取单菌落进行纯化后, VY/2培养基上扩大培养；既得多种初步降解纸类垃圾细菌；

  （4）将所得细菌分别接种在5 ml Dubos 盐培养液内，在Dubos 盐培养液内中添加0．0５g滤纸， 28℃-30℃摇床培养一周，筛选一周内能完全降解滤纸的细菌, 既得降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶目标菌；

  （5）接种筛选得到的降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶目标菌100ul于CMC培养液，28℃-30℃摇床培养24小时，保存菌液。

2.根据权利要求1所说的降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶细菌的制备方法，其特征是：所说的放线菌酮液：称取放线菌酮1.25g，用乙醇溶解后用水定容于100mL容量瓶中，加入95%乙醇50mL,振摇使溶解,加入蒸馏水至200mL，过滤除菌。

3.根据权利要求1所说的降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶细菌的制备方法，其特征是：所说的ST21CX基础液：g/l: KNO3  1.0;  K2HPO4.2H2O 1.0;  MgSO4.7H2O 1.0;  CaCl2.2H2O 1.0; FeCl3.6H2O  0.2;  琼脂粉 15;  pH 7.2-7.4。

4.根据权利要求1所说的降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶细菌的制备方法，其特征是：所说的VY/2培养基: CaCl2·2H2O 0.1% 活性酵母粉0.5%  VB12 50μg/100ml 琼脂1.5%  pH 7.2；VB12灭菌后加入。

5.根据权利要求1所说的降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶细菌的制备方法，其特征是：所说的Dubos 盐培养液 ：g/l: K2HPO4.2H2O 1.0; KCl 0.5; MgSO4.7H2O 0.5; NaNO3  0.5; FeSO4.7H2O 0.01; pH 7.2-7.4，两滴10mM葡萄糖。

6.根据权利要求1所说的降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶细菌的制备方法，其特征是：所说的CMC培养液：每 100 ml 培养液含0.5g glucose, 0.1g NaNO3, 0.1g K2HPO4,0.1g KCl, 0.05g MgSO4。